Удачный криопротокол: Схемы криопротоколов — в естественном цикле и на згт

Содержание

Отзывы

Ольга

10.02.2016

Добрый день. Хочу поделиться своей счастливой, хотя и очень тяжелой историей. Наши хождения по мукам начались в 2008 году. Больницы, анализы, и опять больницы, очереди и уже новые анализы. Все это сопровождалось и слезами и обидами, наверное, это знакомо многим. В центр мы обратились в 2012 году, на первичную консультацию попали к Медведевой В. В. и, если честно, прождали в очереди полтора часа, но впечатления неорганизованности в работе или невнимательности к пациентам не сложилось. Что-то случилось, и врачи работали, так бывает. А дальше нас судьба свела с великолепным врачом, грамотным и квалифицированным специалистом, отзывчивым и вежливым человеком. Маясина Елена Николаевна. В марте 2013 года короткий протокол, гиперстимуляция, дневной стационар и капельницы, и перенос одного эмбриона. Беременность наступила, радости не было предела , но …. На восьмой неделе — страшные слова на УЗИ : «Развитие остановилось, убирать немедленно» . И опять анализы, дообследования у других специалистов, слезы и обиды. Мы никого не обвиняли, напротив, мы просто доверяли своему в рачу. Идти по этому пути ! нужно всем вместе. Следующий криопротокол был в декабре 2013 года, и опять неудачный — эмбрионы просто не прижились. Руки опустились, а ноги сами шли. Третий перенос из крио был в апреле 2014 года, Елена Николаевна тогда уже была в декрете, но все сделала сама, а вот наблюдать нас уже передала Ивановой Ирине Сергеевне. И вот они — долгожданные две палочки, большая цифра ХГЧ . А когда через месяц мы попали на сохранение, Ирина Сергеевна не только нашла нужные слова, чтобы успокоить , но и консультировала по телефону в любой момент, по любому вопросу (х отя тоже была в положении) . И вот , под новый год, наши двойняшечки родились. Недоношенные, очень маленькие, слабенькие , но это уже другая история. Сейчас нам годик и месяц, и , только благодаря слаженной работе всего персонала клиники (регистраторы, медсестры в процедурном кабинете, эмбриологи , медсестры на приеме , врачи) мы счастливая семья. Я от всей души желаю парам, которые ждут своих деток сил, терпения, и полного взаимопонимания с врачами , а всему коллективу клиники огромное спасибо и низкий вам поклон. Ольга , Дмитрий и наши детки Александр и Марина.

отзывы и вопросы о криопереносе эмбрионов

Здравствуйте, было эко, в третьей попытке (криоперенос) есть беременность и сердцебиение, в 10-11 недель на плановом узи выяснилось, что неразвивающаяся с семи недель беременность, сделали выскабливание. Участковый врач советует планировать беременность через полгода, а проводивший эко врач советует через три месяца, так как выскабливание было на ранних сроках. Теперь не могу определиться, когда можно начинать планирование. Подскажите пожалуйста!

КЛАРА, НИЖНЕКАМСК

ОТВЕТИЛ: 16.01.2016

Начните с проведения обследования, лечени выявленой патологии. Спустя 5-6 месяцев можно повторить

Уточняющий вопрос

Похожие вопросы:

Дата Вопрос Статус
06.10.2017

Здравствуйте! Помогите, пожалуйста, определить дату зачатия, вопрос отцовства. Месячные нерегулярные были всегда. Цикл всегда был более 35 дней. С января пила дюфастон 5 циклов, цикл на нем был примерно 28 дней. Потом был перерыв и опять нерегулярный цикл. Перед последними месячными опять пила дюфастон, первый день последних месячных наступил 22 или 23 августа 2017г. 29 августа и 5 сентября были незащищенные ПА. Первое узи прошла 22. 09. 2017, срок беременности поставили 3 недели и 3 дня, СВДПЯ…

04.03.2016

Здравствуйте. Оформляем документы/анализа на Эко. Прошли обследование, анализы. И Узи молочных желез выдал показание — фиброма, назначают операцию. Но не думаем может самим удастся забеременеть. Как операция-наркоз может повлиять на плод, если окажется что есть беременность — малый срок — неделя?

10.03.2018

Здравствуйте. Ходила на УЗИ. По акушерским неделям срок 8 недель. В полости матки визуализируется 1 плодное яицо диаметром 23 мм, что соответствует 6.5 неделям. Желточные мешочки визуализируются, 1-7.7 мм, 2-5.7мм

Эмбрионы визуализируются: 1 — 2.4 мм, 2 — 2.3 мм. Сердцебиение — не регестрируется. Заключение: Беременность 6.5 недель. По плодному яицу, больше данных за неразвивающуюся. Двойня. Узист сказала придти повторно через 2-3 дня, но срок уже большой и сердцебиение уже по-любому должны б…

17.06.2017

Здравствуйте. Помогите мне советом. 08. 06. 2017 сдала ХГЧ. Беременность. 12. 06 закровила. Сразу начала пить Дюфастон по инструкции. 4т. Сразу, потом 1шт. Каждые 8 часов. Только 16. 06 удалось попасть на УЗИ. Была уверенна, что уже нет беременности. Врач сказала, что плодное яйцо в верхней части матки. 3 мм. Срок поставила 4 нед. 5дн. Сказала, что нужно исключить регресс, и переназначила второе УЗИ на 20. 06. Сегодня из меня льет как из ведра. И болит живот. Страшно. Что делать то? Идти на выск…

11.11.2016

Здравствуйте, вопрос для меня очень важен, я уже вся извелась. Помогите! Всего три беременности, первая закончилась благополучно, вторая замершая на сроке 8-9 недель. И вот сейчас третья, подозревают замершую -акушерский срок- 9 недель, делала УЗИ каждые четыре дня. Вот что странно КТР увеличивается каждый раз на 1 мм. Напишу результаты последних двух УЗИ: 7. 10. 16- Объем матки- 86.9, Плодное яйцо- 22. 7, КТР-5 мм; 11. 10. 16- Объем матки-165.6, Плодное яйцо- 24, КТР-6 мм. Сердцебиение не про…

Процедура ЭКО (экстракорпорального оплодотворения) применяется в уже не один десяток лет. За это время на свет таким образом появилось более миллиона детишек, а по некоторым данным их пять миллионов. Известно два варианта этой процедуры: «свежий» перенос и криоперенос эмбрионов. Второй вариант часто назначают при повторных попытках , при тонком эндометрии. И здесь возникает вопрос, насколько часто получается удачный криопротокол.

Немного о криопереносе эмбрионов: преимущества и недостатки

Успешные криопротоколы есть во всех трех вариантах. Главное, чтобы выбран был наилучший для той или иной женщины.

Отзывы о криопротоколе

Удачных криопротоколов достаточно много. Об этом говорят отзывы женщин, прошедших их.

Женщины, которые пришли на криопроцедуру ЭКО, называют «снежинками». Не все из них выживают после разморозки. Это снижает эффективность самой процедуры. Но есть много случаев, что именно так, а не после «свежего» протокола получается положительный результат.

Вот рассказы женщин, у которых получились успешные криопротоколы.

Мария: «У меня не было свежего переноса, сразу крио. И с первого раза получилось. Удача сейчас лежит в кроватке и погремухи терзает».

Лариса: «Мой ад продолжался шесть лет. И за эти долгие годы мое робкое и несмелое «Хочу ребенка!» стало криком души и превратилось в лейтмотив всей моей жизни, поменяв коренным образом меня и мое сознание…

Аппендицит, который я перенесла в детстве, был осложнен перитонитом. Из-за него возник спаечный процесс, в том числе и в обеих трубах. Ни традиционное, ни нетрадиционное лечение результата не дало… Оставалось только ЭКО как единственный шанс… И хоть еще это не полный успех, но есть его вероятность на 30-40 процентов.

… Поехали мы с мужем в одну из лучших клиник, которую нашли в Украине. О ней были только хорошие отзывы. …Потом , успешно полученные 17 эмбрионов, трое из которых мне и подсадили… Я очень чувствовала, что они во мне есть, с ними разговаривала, колыбельные пела. Такое сильное желание было!.. Но, увы, не получилось. Были слезы, разочарования, а потом снова поехали в клинику. И снова подсадили 3 эмбриончика, уже крио, и опять осечка.

… В третий раз я уже ехала пессимистически настроенная, с опущенными руками и почти абсолютно уверенная, что ничего уже и не выйдет, но использовать еще один шанс все же хотелось. Подсадили мне 4 эмбриончика, потом были трудные две недели … Но те мгновения, когда я впервые увидела на две полоски, были более трепетными, чем, наверное, первый поцелуй!.. Пошла (побежала) на УЗИ и там подтверждение: «Да, Вы беременны, один эмбрион, благоприятно расположенный».

У нас родился сынулька. Смотрю на него и будто не со мной все это происходило, и продолжает происходить…».

Как видите, удачные протоколы ЭКО крио есть, хоть часты случаи, когда получается все не с первого и даже не со второго раза. Некоторые женщины проходят процедуру и три, и четыре, и более раз.

Некоторые возникающие вопросы

Результативность криопереноса

У женщин, которым предлагают криопротокол, возникает много вопросов. И первый из них – насколько он результативный. У врачей и в литературе по этому поводу встречается два мнения. Одно мнение – что эффективность «свежей» процедуры и одинаковая. Второе мнение – это то, что криопроцедура менее эффективна. Если же посмотреть отзывы о крио ЭКО, то положительных достаточно. И порой именно после криопереноса наступает долгожданная беременность. Статистика криопротоколов говорит, что результативность их около 70% от обычных. Но и это очень даже хорошо.

Для организма женщины криоперенос более щадящий, так как уже не проводится процедура , хоть гормональная поддержка есть обязательно и здесь.

Здоровье детей, рожденных после криопротокола

Второй вопрос, который возникает: а насколько здоровыми и полноценными будут дети, зачатые из эмбрионов, прошедших криозаморозку?

Исследования эти есть. Статистика после криопротоколов говорит, что, в принципе, детки эти потом практически ничем не отличаются от зачатых естественным путем. К тому же их чаще обследуют, пристальнее следят за здоровьем. Касается это всех . И порой именно этим объясняют статистику выявления у них большего числа некоторых заболеваний. Что касается крио ЭКО, отзывы говорят, что получаются дети порой даже здоровее и талантливее. Ведь эмбрион, перенесший заморозку и разморозку, оказывается более сильным.

Единственно, нужно понимать, что дети, рожденные путем экстракорпорального оплодотворения, в том числе и после удачных протоколов ЭКО крио, как и любые другие, являются , а в ней могут присутствовать и проблемы с деторождением, и предрасположенности к определенным болезням. От этого сложно уйти, но существуют методы диагностики — , позволяющие миновать неприятностей в дальнейшем.

…Многие женщины воспользовались возможностями современных технологий, чтобы стать мамами, и их довольно много – тех, у кого получился удачный криопротокол. Отзывы их, воспоминания о том, как у них всё получилось, вдохновляют.

Вот отзыв Нелли из Израиля, родившей с помощью ЭКО уже несколько детей: «У многих из ближних моих друзей . И, знаете, они все одинаковые, в плане развития, между ними никакой особой разницы нет. Да и все беременности, все разы были хорошими, и наши детки родились здоровенькими».

В Израиле есть бесплатная программа государства, дающая возможность парам воспользоваться процедурой ЭКО. В России сейчас выдаются на это квоты от государства.

В отзывах женщин, прошедших через удачный криопротокол, а также тех, у кого пока беременность не случилась, читаются радость и разочарование, а еще большая воля к победе и безудержное желание познать счастье материнства. И что бы там ни говорили про ЭКО, это шанс, пусть даже порой и небольшой, для тех, кто не может зачать ребенка естественным путем, однако очень хочет, чтобы маленькое чадо-чудо, его кровинушка и продолжение стали явью.

Экстракорпоральное оплодотворение является почти единственным шансом стать родителями для пар, страдающих бесплодием. Однако не каждая попытка заканчивается родами. После процедуры ЭКО может происходить замирание беременности, когда эмбрион по определенным причинам перестает формироваться и гибнет.

Читайте в этой статье

Вероятность замирания беременности

Данная патология является разновидностью невынашивания плода. Риск замирания беременности есть не только у женщин с искусственным оплодотворением, но также при естественном зачатии. Стопроцентных гарантий нет ни у кого. Хотя после ЭКО вероятность замирания беременности несколько выше, она случается примерно в 15% случаях.

На сегодняшний день почти каждое пятое зачатие заканчивается остановкой развития эмбриона.

Трагедия может произойти на любом этапе вынашивания, как на ранних сроках, так и на более поздних. Больше всего вероятность прерывания существует в течение первого триместра на 3 — 4 неделях и на 8 — 11 неделях.

Опаснее всего, когда самопроизвольно прекратившаяся беременность не дает о себе знать , то есть погибший плод и и не выходят. Женщина продолжает думать, что вынашивает будущего малыша.

Узнать об этом можно только по результатам анализов. В случае, если есть признаки прерывания беременности, необходимо немедленно обратиться за врачебной помощью.

  • Отторжение плода организмом матери

При формировании эмбриона выделяются специфические белки, которые могут быть приняты как чужие и опасные. Таким образом иммунитет повышается, и организм сам избавляется от «потенциальной угрозы».

  • Антифосфолипидный синдром

В сосудах плаценты образуются тромбы, которые препятствуют нормальному питанию плода.

  • Возраст пациентки

Если женщина старше 35 лет, то риск невынашивания беременности увеличивается. Это связано с физиологическими особенностями развития организма человека.

  • Предыдущие аборты

Если женщина ранее делала , то внутренние стенки матки (эндометрий) могут быть повреждены, в результате чего повышается вероятность нарушений формирования хориона – будущего «детского места» плода.


Печальная статистика вынашивания беременности в РФ

В данном случае возможность беременности и удачного ее завершения уменьшается по причине сосудистых и метаболических изменений, которые происходят в организме.

  • Вредные привычки и неправильное поведение женщины

Если же произошло замирание беременности, но выкидыш не случился, на сроке до двух месяцев пациентке назначают вакуум-аспирацию или гормональные препараты (медикаментозный аборт), которые вызывают выкидыш. После пары недель проводят контрольное ультразвуковое исследование.


Вакуумный аборт

Если же прерывание случилось на поздних сроках, то также проводят удаление плода и выскабливание внутренней поверхности матки. Эта операция проходит под общим наркозом в больнице. После всех процедур женщина должна пропить курс антибиотиков и лекарств, увеличивающих сократительную способность матки.


Процедура выскабливания

Кроме того, проводят гормональные и иммунологические обследования пациентки. По результатам этих анализов врачи планируют метод и особенности следующего протокола ЭКО.

Зачем назначают криопротокол

Прерывание первой попытки беременности после ЭКО не должно становиться поводом, чтобы опускать руки и переставать пробовать. По результатам анализов после выкидыша, как правило, врачи корректируют программу оплодотворения и лечения. Наиболее современным и эффективным считается криопротокол, когда в матку женщины помещаются ранее замороженные эмбрионы.

Обычно после первой попытки, когда овуляция стимулируется препаратами, организм производит несколько больше яйцеклеток. Некоторые оплодотворенные и в хорошем состоянии замораживают для последующих ЭКО.

Через некоторое время после неудачной попытки врачи рекомендуют криопротокол. Наступление успешной беременности после него намного выше, чем после других программ ЭКО , так как среди размороженных эмбрионов отбираются только самые сильные и жизнеспособные. Так что они имеют более высокую сопротивляемость негативным факторам.

Кроме того, при криопротоколе на женский организм оказывается гораздо меньшая нагрузка медикаментозными препаратами. В данном случае не нужно проводить гормональную стимуляцию овуляции, пункцию фолликулов, оплодотворять эмбрионы и выращивать их сначала. Для криопротокола происходит только подготовка эндометрия и подсадка материала.

Другим важным плюсом является возможность произвести оплодотворение в любой подходящий момент . Криоконсервация эмбрионов может продолжаться несколько лет. А также относительно меньшая стоимость процедуры, так как количество лекарств, назначаемых пациентке, значительно меньше.

Смотрите на видео подробнее о криопротоколе:

Когда можно делать повторное ЭКО

У пары может родиться совершенно здоровый малыш даже после нескольких . Нельзя терять надежду. Однако после неудачной попытки организм должен полностью восстановиться после стресса и подготовиться. Следующее ЭКО стоит планировать не раньше, чем через 5 — 6 месяцев.

Можно ли избежать замирания беременности

Многих женщин волнует вопрос, можно ли было избежать выкидыша, что они сделали неправильно. Чтобы ответить, необходимо разобраться в причинах произошедшего. Если женщина вела здоровый образ жизни, не курила, не употребляла алкоголь или наркотики, не испытывала стресс, не получала травм, но беременность замерла, тогда, ничем другим, как естественным отбором, это объяснить нельзя.

Как правило, на ЭКО идут люди, уже имеющие определенные проблемы со здоровьем. Поэтому не весь биологический материла жизнеспособен. Другими словами, у плода были определенные нарушения в развитии. Таким образом, организм решил прекратить его формирование.

По данным исследований после замершей беременности и выкидыша, более 80% эмбрионов имели те или иные патологии. И в случае, если бы удалось сохранить плод, и ребенок родился, он не был бы здоровым, страдал бы от неизлечимых и тяжелых заболеваний. А подробнее о том, как сохранить беременность на ранних сроках.

Замершая беременность является большим стрессом для женщины, но важно не отчаиваться и продолжать попытки. Много пар смогли иметь здоровых детей даже после нескольких самопроизвольных остановок формирования эмбриона. Одним из ключевых факторов служит выбор грамотного специалиста. При соблюдении всех рекомендаций и здоровом образе жизни следующий протокол обязательно превратится в счастливую беременность и роды.

Криопротокол в программе ЭКО: цель, подготовка, качество результатов

Парам, которые хотят стать родителями и участвуют в программе экстракорпорального оплодотворения, ООО «Нижегородская Медицинская Компания» предоставляет услугу «криопротокола», целью которой является пересадка прошедших криоконсервацию эмбрионов.

Специалисты нашей компании разделяют весь процесс на 2 этапа:

  • Первая половина – стимуляция созревания яйцеклеток, их оплодотворение. После получния эмбрионов осуществляется их криоконсервация.
  • Во второй половине программы подходящие эмбрионы переносятся в матку.

В целом вся программа носит наименование криопротокола и криоцикла. Наши специалисты имеют большой опыт проведения подобной программы, а имеющееся в наличие оборудование позволяет качественно сохранять полученные эмбрионы длительное время без потери жизнеспособности и с сохранением всех функций.

Содержание статьи:

  1. Этапы криопротокола;
  2. Преимущества криопротокола;
  3. Многоплодие.

Этапы криопротокола

Первая половина всей процедуры осуществляется в рамках одного цикла и состоит из последовательности задач:

  1. Подготовка женщины к проводимым мероприятиям.
  2. Стимуляция функции яичников с целью получения яйцеклеток.
  3. После созревания яйцеклеток, специалист осуществляет пункцию, то есть через прокол иглой в стенке влагалища и извлекает яйцеклетки.
  4. Полученные ооциты оплодотворяются сперматозоидами партнера или донорской спермой.
  5. Оплодотворенные яйцеклетки помещаются в питательную среду для дальнейшего развития.
  6. После получения бластоцист, их замораживают с применением технологии криоконсервации.

Этапы экстракорпорального оплодотворения проводятся под контролем опытного специалиста нашей компании, который тщательно следит за состоянием пациентки и качеством выполняемых манипуляций.

Вторая часть ЭКО с трансфером эмбриона осуществляется примерно через промежуток в 4,5 недели, хотя при наличии показаний криопротокол может быть прерван на несколько месяцев. При нормально текущем процессе второй этап проводится без перерыва уже в следующем менструальном цикле.

Перенос эмбриона в полость матки осуществляется при последовательном соблюдении последующих этапов:

  • Эндометрий женщины тщательно готорится к переносу эмбриона. Он должен обеспечить максимально благоприятные условия для закрепления на стенке матки и обеспечения эмбриона питанием для развития.
  • Эмбрионы, отобранные для подсадки, проходят мероприятия по разморозки и проверке на жизнеспособность. Подсаживается только самый качественный образец.
  • Специалист производит отбор подходящего эмбриона, при помощи специального оборудования переносит его в полость матки для дальнейшего закрепления.

Если все процессы проходят успешно, то через определенный промежуток у женщины фиксируется наступление беременности.

Преимущества криопротокола

Этапы эко рассчитываются таким образом, чтобы получить максимальную результативность. Специалисты «НМК» тщательно отслеживают все изменения в организме будущей мамы и действуют, исходя из объективной клинической картины.

Осуществление криопротокола при проведении экстракорпорального оплодотворения способствует значительному снижению рисков осложнения во время течения беременности, в принципе повышает шансы на то, что эмбрион успешно имплантируется в эндометрий женщины. При этом риск получить синдром гиперстимуляции объективно снижается.

При проведении стандартной процедуры ЭКО применяются эстрогенсодержащие препараты, а также стимуляторы повышения восприимчивости эндометрия к переносимому эмбриону. При этом естественная способность к имплантации снижается. Это означает, что так называемое «имплантационное окно» открыто более короткий срок, что значительно сужает благоприятный период. Разрастающийся эндометрий не всегда оказывается нужного качества. недоразвитие питающих сосудов препятствует образованию нормальной плаценты осложнениями в этом случае станут поздний токсикоз, задержки в развитие плода, наличие кровотечений на поздних сроках, повышается вероятность отслойки плаценты и наступлению преждевременных родов.

В случае, если наш специалист обнаружит в ходе подготовительных работ, что могут возникнуть проблемы с развитием качественного эндометрия, пациентке будет предложено разорвать цикл, чтобы пройти необходимую терапию с тем, чтобы привести слизистую матки в благоприятное состояние и в дальнейшем пересадка эмбрионов прошла более успешно.

Многоплодие

Развитие многоплодной беременности серьезная нагрузка на организм матери и настоящие испытание для семьи в целом. Проведение криопротокола ЭКО позволяет избежать ситуации, когда происходит множественная имплантация. В этом случае отпадает необходимость редуцировать лишние зародыши, чтобы обеспечить полноценное развитие одного плода. В случае, если такая манипуляция проводится, риск самопроизвольного прерывания беременности повышается на 20% — это серьезная цифра, учитывая другие трудности, которые приходится преодолевать родителям.

Некоторые специалисты уверены, что пройдя криозаморозку, в дальнейшем эмбрионы становятся более цепкими и вероятность удачного прикрепления к матке повышается. Наши врачи осуществляют в рамках программы трансфер 1 эмбриона. В случае, если закрепления не произойдет, то в следующем месяце попытка повторяется.

Для супружеских пар криопротокол – отличный шанс стать родителями здорового малыша. Подобный подход имеет очевидные преимущества перед стандартными схемами проведения экстракорпорального оплодотворения. Надо отметить, что данный алгоритм применяется избирательно. У него ввиду применения техники криоконсервации будет более высокая стоимость, нежели у стандартной услуги, но это позволит избежать целого перечня осложнений.

 

Актуальность криопротоколов и оптимизации подготовки эндометрия у пациенток с многократными неудачными имплантациями Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

удк: 618.177-089.888.11:616-02:616-07

АКТУАЛЬНОСТЬ КРИОПРОТОКОЛОВ И ОПТИМИЗАЦИИ

ПОДГОТОВКИ ЭНДОМЕТРИЯ У ПАЦИЕНТОК С МНОГОКРАТНЫМИ НЕУДАЧНЫМИ ИМПЛАНТАЦИЯМИ

Вороная В. В.1, Рыбалка А. Н.1, Сулима А. Н.1,3, Литвинов В. В.2,3

‘Кафедра акушерства, гинекологии и перинатологии факультета дополнительного профессионального образования, Медицинская академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского», 29505’, г. Симферополь, бул. Ленина, 5/7, Россия

2ООО «ЭКО центр» (клиника «АльтраВита»), »7’86, г. Москва, ул. Нагорная, 4А, Россия

3ООО «Медицинская клиника «Ваш Доктор», г. Симферополь, ул. Зои Жильцовой, 4, Россия

Для корреспонденции: Сулима Анна Николаевна, доктор медицинских наук, профессор кафедры акушерства,

гинекологии и перинатологии ФДПО, Медицинская академия им. С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «КФУ им. В. И. Вернадского»,

E-mail: [email protected]

For correspondence: Anna N. Sulima, MD, professor of the department of obstetrics, gynecology and perinatology, Faculty of additional professional education, Medical Academy named after S. I. Georgievsky of Vernadsky CFU, E-mail: [email protected]

Information about authors:

Voronaya V. В., http://orcid.org/0000-0003-3972-0681 Rybalka A. N., http://orcid.org/0000-0003-2786-5218 Sulima A. N., http://orcid.org/0000-0002-2671-6985 Litvinov V. V., http://orcid.org/0000-0003-2850-799X

резюме

Представлен обзор литературы отечественных и зарубежных авторов, посвященный вопросам многократных неудач в циклах подготовки эндометрия в криопротоколах вспомогательных репродуктивных технологий. Продемонстрирована ведущая роль эндометрия и периода имплантации в результативности циклов. Рассмотрены базисные механизмы имплантации и проанализированы основные факторы, влияющие на прогноз наступления беременности, а также их диагностическая значимость.

ключевые слова: бесплодие, неудачные попытки вспомогательных репродуктивных технологий, имплантация, рецептивность эндометрия, подготовка эндометрия, хронический эндометрит, криоперенос, криопротокол.

ACTUALITY OF THE FROZEN EMBRYO TRANSFER AND OPTIMIZATION OF AN ENDOMETRIUM PREPARATION AT PATIENTS WITH MULTIPLE IMPLANTATION FAILURE

Voronaya V. V., Rybalka A. N., Sulima A. N., Litvinov V. V.

‘Department of obstetrics, gynecology and perinatology, Faculty of additional professional education, Medical Academy named after S. I. Georgievsky of Vernadsky CFU, Simferopol, Russia 2«IVF Center» (clinic «AltraVita»), Moscow, Russia 3«Medical clinic «Your Doctor, Simferopol, Russia

summary

The article presents a literature review of domestic and foreign authors devoted to the problems of multiple failures in frozen embryo transfer of assisted reproductive technologies. The leading role of the endometrium and implantation period in the effectiveness of cryocycles is demonstrated. The basic mechanisms of implantation are considered and the main factors affecting the prognosis of pregnancy, as well as their diagnostic significance, are analyzed.

Key words: infertility, unsuccessful attempts of assisted reproductive technologies, implantation, endometrial receptivity, endometrial preparation, chronic endometritis, cryotransfer, cryoprotocol.

Первые экспериментальные исследования оплодотворения яйцеклетки вне организма были проведены Rock J. И. и Menkin M. F. (Соединённые Штаты Америки (США), 1944 г.) [1], Shetteles L. (США, 1953-1955 г.) [2], Петров Г. Н. (СССР, Крым, 1955-1959 гг.) [3, 4]. Эпоха вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) в мире началась

25 июля 1978 года, когда британские эмбриолог Edwards R. и гинеколог Steptoe Р., после нескольких лет неудачных попыток оплодотворения и переноса эмбриона в полость матки, получили беременность, которая завершилась родами. В то время наступление беременности после ВРТ исчислялось единичными положительными результатами.

Увеличение результативности циклов ВРТ началось в 80-е и 90-е годы, ознаменовавшиеся совершенствованием протоколов и технологии экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), что привело к увеличению процента наступления беременностей до 26-30% уже к концу 90-х годов [5].

Исследования в области криоконсервации эмбрионов развивались не так быстро — первый ребенок после переноса размороженных эмбрионов (РЭ) родился в 1984 году [6]. По данным Регистра ВРТ Российской ассоциации репродукции человека (РАРЧ) в 2000 году перенос РЭ составлял 5,6% всех циклов ВРТ, беременность наступала в 17,9% случаях [7]. По данным Регистра Европейской ассоциации репродукции человека и эмбриологии (ESHRE) в 1999 году перенос РЭ составил 12,1% , беременность наступила в 15,7% [5].

Прорыв в области криоконсервации эмбрионов (и ооцитов) начался в 2000 году, когда профессор Kuwayama M. (Япония) усовершенствовал технологию витрификации и создал метод сверхбыстрого замораживания криопротекторного раствора, в котором находятся эмбрионы (и ооци-ты), при котором не происходит кристаллизации. Выживаемость эмбрионов после применения метода витрификации полученных Kuwayama M. et al. составляла 90%. Благодаря достигнутым успехам, качество замороженных эмбрионов и их потенциал для имплантации аналогичны тем, которые наблюдаются у свежих эмбрионов [8]. По данным Регистра ВРТ (РАРЧ) 2014 года перенос РЭ в программах ЭКО составил 35,4%, а процент наступления беременностей при переносе РЭ -37,2% [9].

Технология криоконсервации — витрифи-кация, совершила качественный прорыв в результативности программ ВРТ и снизила частоту отмены переноса эмбрионов из-за риска гиперстимуляции яичников (СГЯ), неадекватно подготовленного эндометрия, кровотечения после пункции, повышенного уровня прогестерона в день триггера или любых других незапланированных событий [10].

Высказываются предположения, что акушерские и перинатальные исходы при беременности после ЭКО (свежий перенос) выше, чем после замороженных/размороженных переносов эмбрионов [10]. По данным Liu L. et al., кумулятивный процент наступления беременности в криоци-клах выше, чем при переносе свежих эмбрионов (39,7% против 31,1%). Крайне важен и экономический аспект — общая стоимость (в долларах США), связанная с проведением цикла ЭКО, интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку (ИКСИ) была статистически ниже в группе с криоконсервацией всех эмбрионов (1915673±173299), по сравнению со свежими

циклами (2305972±234702) [11]. Успехи витрифи-кации биологических объектов даже позволили научному сообществу говорить о переводе всех свежих протоколов в крио. Цель этой стратегии заключается в том, чтобы поместить эмбрионы в более выгодную внутриматочную среду (крио-протокол), без возможных негативных последствий гормонального фона (в «свежих» протоколах), которые влияют на рецептивность эндометрия [12]. Безопасность процедур ВРТ является еще одним преимуществом в стратегии криокон-сервации всех эмбрионов, так как отмечается значительное снижение риска развития СГЯ, а также акушерской и перинатальной заболеваемости и смертности [13].

Однако, при всех преимуществах криопере-носа эмбрионов и достижениях в этой области, около 60% циклов ВРТ на сегодняшний день заканчиваются неудачей [9], и на первый план постепенно выходит проблема многократных повторных неудач имплантации.

По данным авторов, около 70% визуально здоровых эмбрионов после переноса не имплантируются в полость матки. В таком случае, после предимплантационной генетической диагностики и исключения всех явных причин, препятствующих благополучному завершению программы, неудачу ВРТ расценивают как нарушение на этапе имплантации эмбрионов [14].

Идея о решающем значении фазы имплантации в исходе ВРТ не нова. Еще в 2006 году лауреат Нобелевской премии Роберт Эдвардс назвал имплантацию эмбриона «последним барьером ВРТ» [15]. Исходя из этого, можно смело предполагать, что диагностика состояния эндометрия и обнаружение доступных для изучения показателей, прогнозирующих исход имплантации, окажет значительное влияние на методы ведения пациенток с многократными неудачами ВРТ и будет способствовать оптимизации подготовки эндометрия к имплантации эмбриона в период нидации и повышению процента благоприятных исходов ВРТ.

Имплантация эмбриона — это, по сути, диалог двух генетически и иммунологически различных структур, представляющий собой сложный комплекс молекулярных и клеточных взаимодействий, регулируемых пара- и аутокринными факторами. Имплантация происходит в три этапа: аппозиция, адгезия и инвазия. Каждый из этих этапов имеет свои особенности, и малейший сбой в каскаде проходящих процессов может привести к срыву имплантации.

Фаза аппозиции характеризуется выраженными стромально-эпителиальными перестройками, где решающие роли играют пиноподии и растворимые медиаторы, такие как цитокины, хемокины (1Ь-8, МСР-1, ИАОТЕБ и прочие), СОХ

энзимы (СОХ-1 и СОХ-2), регулирующие биосинтез простагландинов, и многие другие.

Адгезия бластоцисты — это цепь сложнейших, многоуровневых биохимических реакций, обеспечивающих прямой контакт плазматической мембраны эпителиальных клеток эндометрия и клеток трофобласта по типу лиганд-ре-цепторов. Во многом фаза адгезии зависит от активных гликопротеиновых фракций и карбо-гидратов (в частности, муцин МиС1) в составе эндометрия, Ь-селектина и его олигосахаридного лиганда, молекул адгезии пиноподий (гепаринс-вязывающего эпидермального фактора роста и трофинина) [16].

Инвазия — это самоконтролируемый процесс, позволяющий трофобласту проникнуть в деци-дуальную материнскую ткань, под воздействием активной секреции протеолитических ферментов (серин-протеаз, катепсинов, коллагеназ, желати-наз, стромелизинов, мембранных металлопроте-иназ и других).

Важно отметить, что процесс имплантации ограничен не только морфологическим субстратом, но и временными рамками.е О. в ходе исследований и цикла экспериментов установила, что спонтанная или экспериментальная внематочная беременность может наступить практически в любой ткани человеческого организма и в любое время, а имплантация плодного яйца в эндометрии возможна лишь в определенный промежуток времени, характеризующийся максимальной рецептивно-стью эндометрия, получивший название «окно имплантации» [17].

Условиями успешной имплантации и наступления беременности являются адекватное развитие эндометрия в фолликулярную и люте-иновую фазы овариально-менструального цикла, а также в правильной синхронизации между рецепторами эндометрия, бластоцистой и желтым телом в окно имплантации.

Толщина и морфологическая структура эндометрия являются основными признаками зрелости эндометрия и критериями прогноза успешного наступления беременности [18]. Пролиферация эндометрия коррелирует с секрецией эстрогенов яичниками, в частности эстрадиола, а также с его рецептивностью.

Рецептивность эндометрия представляет собой комплекс морфофункциональных характеристик с четкими временными рамками и определяющий его способность к имплантации бластоци-сты [19]. На протяжении десятилетий измерение рецептивности эндометрия было основано на морфологических критериях, основным из которых с момента появления сканирующей элек-

тронной микроскопии (СЭМ) было определение пиноподий. Физиологическое значение развития пиноподий до конца не понятно, однако есть ряд доказательств, что именно на поверхности пи-ноподий происходят начальные этапы адгезии бластоцисты к рецептивному эндометрию. При использовании СЭМ пиноподии определяются в 78% биопсий эндометрия на 6-й постовулятор-ный день у женщин с регулярным менструальным циклом [20].

Имеются данные, что эндометрий пациенток с неудачными имплантациями в анамнезе характеризуется сниженным числом зрелых пи-ноподий в клетках покровного эпителия. При им-муногистохимическом исследовании биоптатов отмечается дисбаланс между рецепторами к стероидным гормонам в 60% случаев. Происходит снижение количества эстрогеновых рецепторов и фактора, ингибирующего лейкемию, в то же время отсутствует усиление экспрессии цитокина от глубокого слоя эндометрия к более поверхностному [21]. Стоит отметить, что попытки внедрить исследование пиноподий в клиническую практику не во всех случаях было удачным, в том числе из-за труднодоступности СЭМ в повседневной практике, и ряд исследователей отмечают, что образование пиноподии не может быть точным маркером окна имплантации [20].

В 2009 году испанские ученые разработали метод анализа восприимчивости эндометрия (Endometrial Receptivity Analysis (ERA) путем исследования генов в предполагаемые дни имплантации, который помогает индивидуально определить благоприятный период для эмбриотрансфе-ра с целью повышения частоты наступления беременности, особенно у пациенток с многократными неудачными имплантациями в анамнезе [22].

Любая органическая патология, инфекционные агенты, дисгормональные состояния, патология системы гемостаза, нарушения экспрессии генов, дефекты в звеньях клеточного и гуморального иммунитета и многое другое может нарушать рецептивность эндометрия и проявляться в срывах имплантации.

Гистероскопия с последующим фракционным выскабливанием эндометрия и/или пайпель-биопсией эндометрия на сегодня являются «золотым стандартом» в диагностике внутриматочной патологии и оценке морфологической структуры эндометрия у пациенток с многократными неудачными попытками ВРТ. К тому же, по данным Nastri C. O. и соавторов (2013), частота наступления клинической беременности, после проведенной за 7-14 дней до начала проведения индукции суперовуляции (ИСО) штрих-биопсии увеличивалась в 2 раза (49,4% против 29,1%, р=0,01), при этом статистически достоверной разницы в тол-

щине и объеме эндометрия по данным трансвагинального ультразвука отмечено не было [23].

По имеющимся данным, у женщин, страдающих бесплодием и принимающих участие в программе ВРТ, внутриматочная патология диагностируется в 51% случаев. На первом месте — хронический эндометрит — 63,9%, далее полип эндометрия — 30,6%, гиперплазия эндометрия — 25,0%, аденомиоз — 22,2%, синехии и субмукозная миома — по 8,3% [24].

Диагностика органической внутриматочной патологии в современных условиях не представляет особых трудностей благодаря доступности предложенных методов — ультразвукового исследования, гистеросальпингографии, гистеро-сальпингосонографии с использованием цветной допплерографии, гистероскопии, пайпель-биоп-сии эндометрия с последующим гистологическим и бактериологическим исследованием. Использование современных алгоритмов диагностики и лечения внутриматочной патологии в программах ВРТ повышает их результативность. Стоит отметить, что отсутствие органической патологии эндометрия не исключает его функциональную неполноценность [25].

Вопрос о наличии взаимосвязи толщины эндометрия и вероятности последующей имплантации при использовании методов ВРТ остается в определенной мере открытым. Noyes с соавторами при оценке толщины эндометрия в 343 циклах с донорскими яйцеклетками на 12 день стимулированного менструального цикла установили, что толщина эндометрия менее 8 мм ассоциируется с низкой частотой наступления беременностей и родов по сравнению с толщиной эндометрия 9 мм [18]. При этом в работе китайских исследователей при изучении трехслойного паттерна эндометрия одновременно с толщиной эндометрия было показано, что даже в случае толщины эндометрия менее 7 мм при наличии трехслойной структуры частота наступления беременности составляет 24,4%, в то время как в случае отсутствия трехслойности беременность не наступала [26]. Оценка толщины эндометрия более 12 мм неоднозначна, по некоторым данным это ассоциируется с низкой частотой имплантации, хотя есть наблюдения, что толщина эндометрия и в 15 мм не оказывает негативного влияния [18].

В последние годы в ряде научных работ появилось понятие «эндометриопатия», отображающее развившийся в эндометрии синдром регенераторно-пластической недостаточности, итогом которого становится атрофия слизистой оболочки матки и угнетение экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону, без которых имплантация становится маловероятной [27]. Современные исследования в этом направлении

можно разделить по биологическим уровням на генетические, протеомные и гистологические.

Вовлеченность генов в циклическую трансформацию эндометрия огромна. Было показано, что период окна имплантации сопровождается усилением экспрессии около 395 генов и одновременным снижением экспрессии около 186 генов, различных протеаз, транспортных белков, кальция и других ионов, молекул клеточной адгезии и внеклеточных матриксных белков [28, 29]. На данный момент внимание многих исследователей сосредоточено на роли семейства генов HOX и генов, участвующих в регуляции временных рамок окна имплантации (ebaf, ВК66) [30].3, эпи-дермальный фактор роста (EGF), гепарин связывающий эпидермальный фактор роста (HB-EGF), L-селектин (CD62L), колониестимулирующий фактор-1 (CSF-1), инсулиноподобный фактор роста (IGF), фактор некроза опухоли-альфа (TNFa), интерферон-гамма (IFN-y), фактор роста фибро-бластов (FGF) и множество других [31].

Имеются данные, что процесс имплантации затрагивает многие иммунные механизмы [32]. Часть авторов связывают развитие беременности с цитокинами типа Th-2 [33], другие -с Th-1-ассоциированными цитокинами [34], а некоторые отводят ключевую роль маточным натуральным киллерам (NK), которые, согласно ряду исследований, способны регулировать инвазию трофобласта in vitro и in vivo [35] и являются неотъемлемой составляющей дециду-ализации эндометрия.

Заслуживает внимание тезис, что ведущей причиной эмбрионических потерь является патология системы гемостаза [36]. Изучен широкий спектр ростовых факторов, способствующих или тормозящих ангиогенез и влияющих на исход имплантации. Особо выделяют роль сосудистого эндотелиального фактора роста, повышение концентрации которого в сыворотке крови было установлено в ряде случаев неудачной имплантации плодного яйца [31].

Одним из основных факторов, определяющих исход имплантации, является гормональный фон пациентки и степень рецептивности эндометрия к стероидным гормонам. Результаты проведенных в этом направлении исследований зачастую противоречивы, однако, без сомнения, свидетельствуют о том, что в период окна имплантации эпителий эндометрия переходит во временное функциональное стероидзависимое

состояние. Комбинированное воздействие эстра-диолов и прогестинов в этот период абсолютно необходимо для пролиферации и децидуализа-ции эндометрия и его подготовки к имплантации эмбриона.

Доказано, что эстрогены и прогестины влияют на клетки-мишени эндометрия опосредованно и решающая роль отводится не циркулирующим в периферическом кровотоке гормонам, а их взаимодействию с функционально полноценными рецепторами ткани эндометрия к соответствующим стероидным гормонам. Отмечается, что именно генетически детерминированное развитие эстрогеновых рецепторов определяет активность гранулезных клеток и готовность эндометрия к имплантации, что подтверждается различной степенью зрелости эндометрия при одинаковом количестве эстрогенов [37, 38].

Эстрогены оказывают на процесс имплантации пермиссивное действие, стимулируя развитие секреторного аппарата клетки; регулируя секрецию и активность цитокинов, молекул адгезии и факторов роста; и усиливая синтез собственных рецепторов, а также рецепторов к прогестерону и андрогенам, и тем самым обеспечивая полноценную секреторную трансформацию эндометрия.

Прогестерон во многом обеспечивает подготовку слизистой оболочки матки к имплантации, участвуя в процессах формирования рецептив-ности эндометрия, регулирования миграции и инвазии трофобласта. Снижение концентрации рецепторов прогестерона в эпителиальных клетках, при сохранении высокой в децидуальных, является ключевым в подготовке эндометрия к имплантации — происходит переход от преобладания активности эпителия к активизации стро-мальной и децидуальной функций.

На данный момент прямая зависимость между концентрацией эстрадиола, прогестерона, соотношением эстрадиол/прогестерон в сыворотке крови и морфологической структурой эндометрия не обнаружена. Исследования последних лет указывают на то, что это является особенностью рецептивности эндометрия женщин с бесплодием, изменением концентрации циклических ну-клеотидов и особенностью клеточного иммунитета эндометрия [39].

Появились сообщения об изучении взаимосвязи секреции макрофагально-гранулоцитарного (ОМ-С8Б) колониестимулирующего фактора в яичниках у больных с сочетанными формами бесплодия и эффективностью цикла ЭКО. 8а1ша881 А. с соавторами показали, что уровень ОМ-С8Б в циркулирующей крови может быть прогностическим фактором для исхода ЭКО [40].

В последние несколько лет большинство из усовершенствований в технологии ЭКО были на-

правлены на улучшение качества эмбрионов, но не были связаны с изучением внутриматочной микросреды и ее влияния на имплантацию эмбрионов [41]. Большинство из немногочисленных предложенных показателей оптимизации эндометрия в практической медицине труднодоступны для изучения ввиду необходимости дорогостоящей материально-технической базы и узкопрофилированных специалистов.

Более глубокое понимание прикрепления эмбриона и его имплантации может привести к улучшению лечения бесплодия и новых методов контрацепции. Young S. L. (2013) в своей работе показывает, что, несмотря на большое количество гормонов, вырабатываемых яичниками, только два из них, эстроген и прогестерон, являются достаточными для подготовки эндометрия к имплантации в организме человека.

Согласно резолюции Совета Экспертов РАРЧ, которая состоялась в Санкт-Петербурге 23 мая 2015 года, применение эстрогенов занимает отдельное место в протоколах с использованием криоконсервированных эмбрионов. Экспертами отмечена важная роль эстрогенов при проведении предгравидарной подготовки в циклах, предшествующих беременности, для восстановления структуры и рецептивности эндометрия [18].

Технология заморозки/разморозки эмбрионов в современных условиях подняла на более качественный уровень эффективность криопро-токолов (Регистр РАРЧ 2014 года — наступление беременности в РЭ — 37,2%). Относительно небольшие затраты на криопрограммы позволяют сокращать количество дополнительных протоколов ЭКО, ИКСИ и повышать кумулятивный эффект программ ЭКО. Исследования в этой области ВРТ важны с медицинской точки зрения: снижение развития осложнений ввиду неизбежного уменьшения количества протоколов ИСО, пункций яичников, развития СГЯ, кровотечений, а также осложнений во время беременности и родов после переноса эмбрионов в свежем цикле. Экономическая составляющая характеризуется снижением затрат пациентов, медицинских центров/стационаров на получение положительного результата в программах ВРТ — беременности (кумулятивный эффект), в дальнейшем ведения/ наблюдения и родов здоровым ребёнком («take home baby»). Поэтому на данном этапе крайне перспективными представляются соискания в области поиска достоверных, прогностически значимых и доступных для изучения в повседневной практике показателей состояния эндометрия, позволяющих максимально точно оценить степень его оптимизации к криоциклу и предсказать исход программ ВРТ и, в перспективе, повысить эффективность протоколов заморозки/разморозки.

выводы

1. Несмотря на немалое количество отечественных и зарубежных публикаций по проблеме неудач имплантации в криопротоколах ВРТ, литературные данные по выбору оптимальной схемы подготовки эндометрия практически отсутствуют, хотя необходимость в этом на современном этапе не вызывает сомнений.

2. Все выше сказанное, несомненно, указывает на актуальность проблемы повышения эффективности криопротоколов ВРТ, особенно у пациенток с множественными неудачными имплантациями, и перспективность исследований в этом направлении.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

литература

1. Rock J., Menkin M.F. In vitro fertilization and cleavage of human ovarian eggs. Science. 1944; 100(2588): 105-107. doi: 10.1126/ science.100.2588.105.

2. Shettles L.B. A morula stage of human ovum developed in vitro. Fertil. Steril. 1955;6(4):287-289.

3. Петров Г.Н. Оплодотворение яйцеклеток у человека вне организма. Труды Крымского мединститута. 1957;17:25-26.

4. Петров Г.Н. Оплодотворение и первые стадии дробления яйца человека вне организма. Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1958;35(1):88-91.

5. Nygren K.G., Andersen A.N. Assisted reproductive technology in Europe, 1999. Results generated from European registers by ESHRE. Hum. Reprod. 2002;17(12):3260-3274.

6. Кузьмичев Л.Н., Штыря Ю.А. Экстракорпоральное оплодотворение. Информация к размышлению. М.: Издательство СИМК; 2012.

7. Корсак В.С. Мониторинг ВРТ. Доступно по: http://www.rahr.ru/d_registr_otchet/vrt_2000. pdf. Ссылка активна на 09.01.2017.

8. Cobo A., de los Santos M.J., Castello D., Gamiz P., Campos P., Remohi J. Outcomes ofvitrified early cleavage-stage and blastocyst-stage embryos in a cryopreservation program: evaluation of 3,150 warming cycles. Fertil. Steril. 2012;98(5):1138-1146. doi: 10.1016/j.fertnstert.2012.07.1107.

9. Корсак В.С. Мониторинг ВРТ. Регистр ВРТ РАРЧ. Юбилейный 20-й отчет за 2014 год. СПб: ООО «Лакшери Принт»; 2014.

10. Pandey S., Shetty A., Hamilton M., Bhattacharya S., Maheshwari A. Obstetric and perinatal outcomes in singleton pregnancies resulting from IVF/ICSI: a systematic review and meta-analysis. Hum. Reprod. Update. 2012;18(5):485-503. doi: 10.1093/humupd/dms018.

11. Roque M., Valle M., Guimaraes F., Sampaio M., Geber S. Freeze-all policy: fresh vs. frozen-thawed embryo transfer. Fertil. Steril. 2015;103(5):1190-1193. doi: 10.1016/j.fertnstert.2015.01.045.

12. Shapiro B. S., Daneshmand S.T., Garner F.C., Aguirre M.A., Hudson C., Thomas S. High ongoing pregnancy rates after deferred transfer through bipronuclear oocyte cryopreservation and post-thaw extended culture. Fertil. Steril. 2008;92(5):1594-1599. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.08.103.

13. Nastri C.O., Ferriani R.A., Rocha I.A., Martins W.P. Ovarian hyperstimulation syndrome: pathophysiology and prevention. J. Assist. Reprod. Genet. 2010;27(2-3):121-128. doi: 10.1007/s10815-010-9387-6.

14. Носенко Е.Н., Саенко А.И., Постолюк И.Г. Рецепторный статус эндометрия у бесплодных женщин с неудачными попытками вспомогательных репродуктивных технологий в анамнезе. Таврический медико-биологический вестник. 2013;16(2;2):80-82.

15. Боярский Ю.К., Гайдуков С.Н., Пальчен-ко Н.А. Современный взгляд на проблему рецеп-тивности и тонкого эндометрия в программах ВРТ (обзор литературы). Проблемы репродукции. 2013;4:51-60.

16. Salamonsen L.A., Hannan N.J., Dimitriadis E. Cytokines and chemokines during human emryo implantation: roles in implatation and early placentation. Semin. Repord. Med. 2007;25(6):437-444. doi: 10.1055/s-2007-991041.

17. Delage G., Moreau J.F., Taupin J.L., Freitas S., Hambartsoumian E., Olivennes F., Fanchin R., Letur-Konirsch H., Frydman R., Chaouat G. In-vitro endometrial secretion of human interleukin for DA cells/leukaemia inhibitory factor by explant cultures from fertile and infertile women. Hum. Reprod. 1995;10(9):2483-2488.

18. Применение эстрогенов в программах ВРТ: научно-практические рекомендации. РАРЧ. 2015. Доступно по: http://www.rahr.ru/d_ pech_mat_metod/estrogen.pdf. Ссылка активна на 11.01.2017.

19. Коган Е.А., Демура Т.А., Водяной В.Я., Шуршалина А.В. Молекулярные и морфологические аспекты нарушений рецептивности эндометрия при хроническом эндометрите. Архив патологии. 2012;74(3):15-17.

20. Носенко Е.Н., Саенко А.И., Парницкая О.И., Головатюк Е.П. Особенности формирования пи-ноподий в эндометрии в зависимости от наличия в нем хронических воспалительных и гиперпро-лиферативных процессов у женщин хороших ответчиков с неудачными попытками вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) в анамнезе. Современные проблемы науки и образования. 2014;6:1158-1159.

21. Левиашвили М.М., Демура Т.А., Ми-шиева Н.Г., Файзуллина Н.М., Назаренко Т.А., Коган Е.А. Оценка рецептивности эндометрия у пациенток с безуспешными программами экстракорпорального оплодотворения в анамнезе. Акушерство и гинекология. 2012;4(1):65-69.

22. Ruiz-Alonso M., Blesa D., Díaz-Gimeno P., Gómez E., Fernández-Sánchez M., Carranza F., Carrera J., Vilella F., Pellicer A., Simón C. The endometrial receptivity array for diagnosis and personalized embryo transfer as a treatment for patients with repeated implantation failure. Fertil. Steril. 2013;100(3):818-824. doi: 10.1016/j. fertnstert.2013.05.004.

23. Nastri C.O., Ferriani R.A., Raine-Fenning N., Martins W.P. Endometrial scratching performed in the non-transfer cycle and outcome of assisted reproduction: a randomized controlled trial. Ultrasound Obstet. Gynecol. 2013;42(4):375-382. doi: 10.1002/uog.12539.

24. Рудакова Е.Б., Давыдов П.В., Давыдов В.В. Новые возможности диагностики внутриматоч-ной патологии в программах вспомогательных репродуктивных технологий. Лечащий врач. 2013;11:10-14.

25. Mariee N., Li T.C., Larid S.M. Expression of leukaemia inhibitory factor and interleukin 15 in endometrium of women with recurrent implantation failure after IVF; correlation with the number of endometrial natural killer cells. Hum. Reprod. 2012;27(7):1946-1954. doi: 10.1093/humrep/des134.

26. Chen S.L., Wu F.R., Luo C., Chen X., Shi X.Y., Zheng H.Y., Ni Y.P. Combined analysis of endometrial thickness and pattern in predicting outcome of in vitro fertilization and embryo transfer: a retrospective cohort study. Reprod. Biol. Endocrinol. 2010;8:30. doi: 10.1186/1477-7827-8-30.

27. Маринкин И.О., Кулешов В.М., Или-зарова Н.А., Айдагулова С.В. Закрытое окно. StatusPraesens. 2014;6(23;12):74-80.

28. Bagot C.N., Troy P.J., Taylor H.S. Alteration of maternal HOX 10 expression by in vitro gene transfection affects implantation. Gene Ther. 2000;7(10):1738-1384. doi: 10.1038/sj.gt.3301245.

29. Zhang S.Y., Lin X.N., Song T., Tong X.M., Shu J., Huang H.F. Gene expression profiles of peri-implantation endometrium in natural and superovulation cycles. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2008;88(33): 2343-2346.

30. Haouzi D., Mahmoud K., Fourar M., Bendhaou K., Dechaud H., De Vos J., Reme T., Dewailly D., Hamamah S. Identification of new biomarkers of human endometrial receptivity in the natural cycle. Hum. Reprod. 2009;24(1):198-205. doi: 10.1093/humrep/den360.

31. Волкова Л.В., Аляутдина О.С. Клинико-диагностическое значение сосудисто-эндотели-

ального фактора роста при неудачных попытках ЭКО. Акушерство и гинекология. 2011;4:126-129.

32. Kimber S.J., Spanswick C. Blastocyst implantation: the adhesion cascade. Semin. Cell. Dev. Biol. 2000; 11(2):77-92. doi: 10.1006/scdb.2000.0154.

33. Chaouat C., Cayol V., Mairovitz V., Dubanchet S. Localication of the Th3 cytokines IL-3, IL-4, IL-10, at the fetomaternal interface during human and murine pregnancy and lack of requirement for Fas/Fas ligand interaction for a successful allogenic pregnancy. Am. J. Reprod. Immunol. 1999; 42(1):1-13.

34. Agrawal R., Loganath A., Roy A.C., Wong Y.C., Ng S.C. Effect of T-helper 1 cytokines on secretion of T-helper 2 cytokines by term trophoblast cells in culture. Gynecol. Endocrynol. 2000;14(5):305-310.

35. King A. Uterine leukocytes and decidualization. Hum. Reprod. Update. 2000;6Q):28-36.

36. Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология: руководство для врачей. 3-е издание, перераб. и доп. М.: Медицинское информационное агентство; 2005.

37. Ellmann S., Sticht H., Thiel F., Beckmann M.W., Strick R., Strissel P.L. Estrogen and progesterone receptors: from molecular structures to clinical targets. Cell. Mol. Life Sci. 2009;66(15): 2405-2426. doi: 10.1007/s00018-009-0017-3.

38. Hannan N.J., Paiva P., Dimitriadis E., Salamonsen L.A. Models for study of human embryo implantation: choice of cell lines? Biol. Reprod. 2010;82(2):235-245. doi: 10.1095/ biolreprod.109.077800.

39. Friedler S., Zimmermen A., Schachter M., Raziel A., Strassburger D., El R.R. The midluteal decline in serum estradiol levels is drastic but not deleterious for implantation after in vitro fertilization and embryo transfer in patients with normal or high responses. Fertil. Steril. 2005;83(1):54-60. doi:10.1016/j.fertnstert.2004.08.017.

40. Salmassi A., Mettler L., Jonat W., Buck S., Koch K., Schmutzler A.G. Circulating level of macrophage colony-stimulating factor can be predictive for human in vitro fertilization outcome. Fertil. Steril. 2010;93(1):116-123. doi: 10.1016/j. fertnstert.2008.09.083.

41. Evans J., Hannan N.J., Edgell T.A., Vollenhoven B.J., Lutjen P.J., Osianlis T., Salamonsen L.A., Rombauts L.J. Fresh versus frozen embryo transfer: backing clinical decisions with scientific and clinical evidence. Hum. Reprod. Update. 2014;20(6):808-821. doi: 10.1093/humupd/ dmu027.

references

1. RockJ., MenkinM.F. Invitro fertilizationandcleavage of human ovarian eggs. Science. 1944;100(2588):105-107. doi: 10.1126/science.100.2588.105.

2. Shettles L.B. A morula stage of human ovum developed in vitro. Fertil. Steril. 1955;6(4):287-289.

3. Petrov G.N. Oplodotvorenie jajcekletok u cheloveka vne organizma. Trudy Krymskogo medinstituta. 1957;17:25-26. (In Russ).

4. Petrov G.N. Fertilization and the first stages of crushing the human egg outside the body. Arhiv anatomii, gistologii i jembriologii. 1958;35(1):88-91. (In Russ).

5. Nygren K.G., Andersen A.N. Assisted reproductive technology in Europe, 1999. Results generated from European registers by ESHRE. Hum. Reprod. 2002;17(12):3260-3274.

6. Kuz’michev L.N., Shtyrja Ju.A. Jekstrakorporal’noe oplodotvorenie. Informacija k razmyshleniju. M.: Izdatel’stvo SIMK; 2012. (In Russ).

7. Korsak V.S. Monitoring VRT. Dostupno po: http://www.rahr.ru/d_registr_otchet/vrt_2000.pdf. Ssylka aktivna na 09.01.2017. (In Russ).

8. Cobo A., de los Santos M.J., Castello D., Gamiz P., Campos P., Remohi J. Outcomes of vitrified early cleavage-stage and blastocyst-stage embryos in a cryopreservation program: evaluation of 3,150 warming cycles. Fertil. Steril. 2012;98(5):1138-1146. doi: 10.1016/j.fertnstert.2012.07.1107.

9. Korsak V.S. Monitoring VRT. Registr VRT RARCh. Jubilejnyj 20-j otchet za 2014 god. SPb: OOO «Laksheri Print»; 2014. (In Russ).

10. Pandey S., Shetty A., Hamilton M., Bhattacharya S., Maheshwari A. Obstetric and perinatal outcomes in singleton pregnancies resulting from IVF/ICSI: a systematic review and meta-analysis. Hum. Reprod. Update. 2012;18(5):485-503. doi: 10.1093/humupd/dms018.

11. Roque M., Valle M., Guimaraes F., Sampaio M., Geber S. Freeze-all policy: fresh vs. frozen-thawed embryo transfer. Fertil. Steril. 2015;103(5):1190-1193. doi: 10.1016/j.fertnstert.2015.01.045.

12. Shapiro B. S., Daneshmand S.T., Garner F.C., Aguirre M.A., Hudson C., Thomas S. High ongoing pregnancy rates after deferred transfer through bipronuclear oocyte cryopreservation and post-thaw extended culture. Fertil. Steril. 2008;92(5):1594-1599. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.08.103.

13. Nastri C.O., Ferriani R.A., Rocha I.A., Martins W.P. Ovarian hyperstimulation syndrome: pathophysiology and prevention. J. Assist. Reprod. Genet. 2010;27(2-3):121-128. doi: 10.1007/s10815-010-9387-6.

14. Nosenko O.M., Sayenko A.I., Postolyuk I.G. The receptor status of endometrium in infertile women with unsuccessful attempts of assisted reproductive technologies in anamnesis. Tavricheskij mediko-biologicheskij vestnik 2013;16(2;2):80-82. (In Russ).

15. Boiarskii K.Iu., Gaidukov S.N., Pal’chenko N.A. Modern look on endometrial receptivity and thin

endometrium in art cycles (a review). Problemy reprodukcii. 2013;4:51-60. (In Russ).

16. Salamonsen L.A., Hannan N.J., Dimitriadis E. Cytokines and chemokines during human emryo implantation: roles in implatation and early placentation. Semin. Repord. Med. 2007;25(6):437-444. doi: 10.1055/s-2007-991041.

17. Delage G., Moreau J.F., Taupin J.L., Freitas S., Hambartsoumian E., Olivennes F., Fanchin R., Letur-Konirsch H., Frydman R., Chaouat G. In-vitro endometrial secretion of human interleukin for DA cells/leukaemia inhibitory factor by explant cultures from fertile and infertile women. Hum. Reprod. 1995;10(9):2483-2488.

18. Primenenie jestrogenov v programmah VRT: nauchno-prakticheskie rekomendacii. RARCh. 2015. Dostupno po: http://www.rahr.ru/d_pech_mat_metod/ estrogen.pdf. Ssylka aktivna na 11.01.2017. (In Russ).

19. Kogan E.A., Demura T.A., Vodianoi V.Ia., Shurshalina A.V. Molecular and morphological aspects of endometrial receptivity disorders at chronic endometritis. Arhiv patologii. 2012;74(3):15-17. (In Russ).

20. Nosenko E.N., Saenko A.I., Parnitskaya O.I., Golovatyuk E.P. The particularities of pinopodes formation in endometrium depending on availability of chronic inflammatory and hyperproliferative processes in him in women good responders with unsuccessful attempts of assisted reproductive technology (ART) in anamnesis. Sovremennye problemy nauki i obrazovanija. 2014;6:1158-1159. (In Russ).

21. Leviashvili M.M., Demura T.A., Mi-shiyeva N.G., Faizzullina N.M., Nazarenko T.A., Kogan E.A. Evaluation of endometrial receptivity in patients with a history of failed in vitro fertilization programs. Akusherstvo i ginekologija. 2012;4(1):65-69. (In Russ).

22. Ruiz-Alonso M., Blesa D., Díaz-Gimeno P., Gómez E., Fernández-Sánchez M., Carranza F., Carrera J., Vilella F., Pellicer A., Simón C. The endometrial receptivity array for diagnosis and personalized embryo transfer as a treatment for patients with repeated implantation failure. Fertil. Steril. 2013;100(3):818-824. doi: 10.1016/j.fertnstert.2013.05.004.

23. Nastri C.O., Ferriani R.A., Raine-Fenning N., Martins W.P. Endometrial scratching performed in the non-transfer cycle and outcome of assisted reproduction: a randomized controlled trial. Ultrasound Obstet. Gynecol. 2013;42(4):375-382. doi: 10.1002/uog.12539.

24. Rudakova E.B., Davydov P.V., Davydov V.V. New possibilities ofdiagnostics ofintrauterine pathology in programs of assisted reproductive technologies. Lechashhij vrach. 2013;11:10-14. (In Russ).

25. Mariee N., Li T.C., Larid S.M. Expression of leukaemia inhibitory factor and interleukin 15 in endometrium of women with recurrent implantation

failure after IVF; correlation with the number of endometrial natural killer cells. Hum. Reprod. 2012;27(7):1946-1954. doi: 10.1093/humrep/des134.

26. Chen S.L., Wu F.R., Luo C., Chen X., Shi X.Y., Zheng H.Y., Ni Y.P. Combined analysis of endometrial thickness and pattern in predicting outcome of in vitro fertilization and embryo transfer: a retrospective cohort study. Reprod. Biol. Endocrinol. 2010;8:30. doi: 10.1186/1477-7827-8-30.

27. Marinkin I.O., Kuleshov V.M., Ilizarova N.A., Aidagulova S.V. Closed window. StatusPraesens. 2014;6(23;12):74-80. (In Russ).

28. Bagot C.N., Troy P.J., Taylor H.S. Alteration of maternal HOX 10 expression by in vitro gene transfection affects implantation. Gene Ther. 2000;7(10):1738-1384. doi: 10.1038/sj.gt.3301245.

29. Zhang S.Y., Lin X.N., Song T., Tong X.M., Shu J., Huang H.F. Gene expression profiles of peri-implantation endometrium in natural and superovulation cycles. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2008;88(33): 2343-2346.

30. Haouzi D., Mahmoud K., Fourar M., Bendhaou K., Dechaud H., De Vos J., Reme T., Dewailly D., Hamamah S. Identification of new biomarkers of human endometrial receptivity in the natural cycle. Hum. Reprod. 2009;24(1):198-205. doi: 10.1093/humrep/den360.

31. Volkova L.V., Alyautdina O.S. The clinical and diagnostic value of vascular endothelial growth factor on IVF attempts. Akusherstvo i ginekologija. 2011;4:126-129. (In Russ).

32. Kimber S.J., Spanswick C. Blastocyst implantation: the adhesion cascade. Semin. Cell. Dev. Biol. 2000; 11(2):77-92. doi: 10.1006/scdb.2000.0154.

33. Chaouat C., Cayol V., Mairovitz V., Dubanchet S. Localication of the Th3 cytokines IL-3, IL-4, IL-10, at the fetomaternal interface during human and murine pregnancy and lack of requirement for Fas/Fas ligand interaction for a successful allogenic pregnancy. Am. J. Reprod. Immunol. 1999; 42(1):1-13.

34. Agrawal R., Loganath A., Roy A.C., Wong Y.C., Ng S.C. Effect of T-helper 1 cytokines on secretion of T-helper 2 cytokines by term trophoblast cells in culture. Gynecol. Endocrynol. 2000;14(5):305-310.

35. King A. Uterine leukocytes and decidualiza-tion. Hum. Reprod. Update. 2000;6(1):28-36.

36. Smetnik V.P., Tumilovich L.G. Neoperativnaja ginekologija: rukovodstvo dlja vrachej. 3-e izdanie, pererab. i dop. M.: Medicinskoe informacionnoe agentstvo; 2005. (In Russ).

37. Ellmann S., Sticht H., Thiel F., Beckmann M.W., Strick R., Strissel P.L. Estrogen and progesterone receptors: from molecular structures to clinical targets. Cell. Mol. Life Sci. 2009;66(15): 2405-2426. doi: 10.1007/s00018-009-0017-3.

38. Hannan N.J., Paiva P., Dimitriadis E., Salamonsen L.A. Models for study of human embryo implantation: choice of cell lines? Biol. Reprod. 2010;82(2):235-245. doi: 10.1095/ biolreprod.109.077800.

39. Friedler S., Zimmermen A., Schachter M., Raziel A., Strassburger D., El R.R. The midluteal decline in serum estradiol levels is drastic but not deleterious for implantation after in vitro fertilization and embryo transfer in patients with normal or high responses. Fertil. Steril. 2005;83(1):54-60. doi:10.1016/j.fertnstert.2004.08.017.

40. Salmassi A., Mettler L., Jonat W., Buck S., Koch K., Schmutzler A.G. Circulating level of macrophage colony-stimulating factor can be predictive for human in vitro fertilization outcome. Fertil. Steril. 2010;93(1):116-123. doi: 10.1016/j. fertnstert.2008.09.083.

41. Evans J., Hannan N.J., Edgell T.A., Vollenhoven B.J., Lutjen P.J., Osianlis T., Salamonsen L.A., Rombauts L.J. Fresh versus frozen embryo transfer: backing clinical decisions with scientific and clinical evidence. Hum. Reprod. Update. 2014;20(6):808-821. doi: 10.1093/humupd/ dmu027.

Подсадка (перенос) эмбрионов при ЭКО

Подсадка эмбрионов или грамотнее, перенос эмбриона в полость матки, – завершающий этап программы ЭКО.

 

Для пациентки это всегда этап переживаний, так как предстоит 10-14 дней ожидания – удачная попытка лечения или неудачная. Различают перенос эмбрионов (подсадку эмбрионов) в «свежем» цикле, т.е. сразу после стимуляции и перенос криоконсервированных эмбрионов после размораживания.

Технически, для врача, это не сложная процедура, но бывают и «трудные» переносы.

Какой-либо подготовки к подсадке не требуется, если врач будет проводить перенос эмбриона под контролем УЗИ, врач попросит вас не мочиться перед переносом, чтобы был виден на УЗИ наполненный мочевой пузырь. Если же УЗИ контроль проводят после переноса эмбриона, то перед переносом можно опорожнить мочевой пузырь, это более комфортно.

Утром, перед переносом вам можно принять душ, провести все гигиенические мероприятия, принять все рекомендуемые врачом препараты, включая шарики во влагалище, позавтракать и отправляться в клинику.

Как происходит перенос эмбриона в полость матки?

В клинике вас проводят в специальную комнату — комната переноса эмбриона, которая граничит с эмбриологической лабораторией, где вы располагаетесь на гинекологическом кресле. При помощи УЗИ врач измеряет длину цервикального канала, осматривает яичники, жидкость в позадиматочном пространстве, если перенос происходит в «свежем» цикле,  и говорит эмбриологу длину цервикального канала, чтобы эмбриолог выставил метку на катетере (в который будет помещен эмбрион). Затем врач при помощи гинекологического зеркала оголяет (обнажает) шейку матки. Мягким тампоном производит обработку слизистой шейки и влагалища. Чем обрабатывают слизистую? Чаще всего это нейтральная среда, например, физраствор) допускается обработка питательными средами. После того, как слизистая шейки и влагалища обработана, врач говорит эмбриологу, что готов к переносу. Эмбриолог под бинокулярной лупой набирает в катетер эмбрион вместе с питательной средой. Существует очередность набора эмбриона в катетер: среда-пузырик-эмбрион- пузырик -среда. Катетеры, которые используют при переносе эмбрионов бывают разные: с проводником, с мягким кончиком, более жесткие, изогнутые и прямые. В нашей клинике мы используем только импортные катетеры. Каждый врач выбирает для себя наиболее подходящий катетер.

В Америке, некоторые врачи предпочитают металлические катетеры, мы предпочитаем одноразовые пластиковые. Все катетеры сертифицированы и проверены на биологическую безопасность. Скорость переноса эмбриона очень важна, эмбрион не любит свет и воздушную среду.

Затем эмбриолог передает катетер врачу и произносит фамилию пациентки, чей эмбрион он передает. Это важно для идентификации пациентки.

Врач вводит катетер в цервикальный канал и проходит за внутренний зев, примерно на 2 см и нажимает на поршень шприца, к которому прикреплен катетер. Затем катетер вынимается из полости матки при этом поршень шприца не отпускается, чтобы эмбрион не «всосался» обратно в катетер.

Катетер передается в руки эмбриолога, который проверяет под лупой не остался ли эмбрион в катетере? Если перенос произошел и в катетере не остался эмбрион, врач удаляет гинекологическое зеркало и проверяет при помощи УЗИ где расположился эмбрион в полости матки. Что видит врач?

На УЗИ в полости матки мы видим пузырьки, которые имеют гиперэхогенную структуру. Эмбрион глазом мы не видим, так как он очень мал.

На какой день развития эмбриона может проводиться перенос?

Допускается перенос с 2 по 6 сутки развития эмбриона. Сроки переноса согласуются с эмбриологом, это зависит от количества и от качества переносимых эмбрионов. В нашей стране регламентировано переносить не более 2-х эмбрионов, для того, чтобы предотвратить развитие многоплодной беременности. Если же у женщины плохого качества эмбрионы или много неудачных попыток, то заполняется согласие пациентки на перенос более 2-х эмбрионов в полость матки. SET селективный перенос 1 эмбриона – сейчас это предпочтительный метод, особенно если эмбриону проведено генетическое типирование. Перенос наиболее лучшего эмбриона SET – законодательно принят в Швеции.

Какие осложнения могут произойти во время переноса эмбриона?

— врач не может пройти цервикальный канал из-за изгибов, сращений и т.д. – в этом случае эмбрион перекладывается в более жесткий катетер с проводником и проводят перенос;

— эмбрион после переноса обнаружен в катетере – его набирают вновь и снова проводят перенос эмбриона.

Пациентка не может расслабиться и просит дать ей наркоз – это происходит крайне редко, так как процедура безболезненна.

Нужно ли закладывать вагинальные свечи (с прогестероном) перед переносом? Да, утренние свечи (шарики) необходимо утром ввести.

Как вести себя после переноса эмбриона в полость матки?

  • половой и физический покой до 6 недель беременности;
  • принимать препараты для поддержки беременности;
  • отказаться от алкоголя и курения;
  • не принимать горячие ванны и не посещать сауну;
  • необходимо отказаться от работы в ночную смену и воздержаться от поднятия тяжестей (более 3 кг).

Что такое двойной перенос?

Это когда переносят 1 эмбрион на 3 сутки его развития, а второй эмбрион переносят через 2 дня на 5 сутки развития. Данная методика рекомендована для пациентов с малым количеством эмбрионов и есть вероятность, что до 5-х суток эмбрионы не доростут.

Что такое пробный перенос?

Если у пациентки были какие-либо хирургические вмешательства на шейке матки, синехии в цервикальном канале, то чтобы катетер с эмбрионом хорошо прошел цервикальный канал, пациентке на 3-5 день менструального цикла, а чаще, в день начала стимуляции вводят пустой катетер, которым проходят цервикальный канал, если канал сильно искривлен, врач зарисовывает себе ход канала. Если же цервикальный канал пройти не удается, то пациентка направляется на гистероскопию и стимуляцию не начинают. Однако, учитывая, что пациентка прошла подготовку и обследование перед ЭКО врач и пациентка могут принять решение о прохождении протокола ЭКО, но затем криоконсервировать эмбрионы, это называется – отсроченный перенос.

После того, как все проблемы с цервикальным каналом будут решены, то пациентку возьмут на подсадку в криопротоколе.

Стресс —  практически все переживают это состояние в период 10-14 дней, пока не сдадут анализ крови бета ХГЧ. Мы не рекомендуем принимать сильные антидепрессанты и обсудите с психологом или психиатром, что можно вам принимать во время беременности. Так как после переноса эмбриона в полость матки – вы считаетесь беременной. Многие женщины в этот период делают ежедневно тест на беременность – тест появляется на 10 день после переноса 5-суточных эмбрионов, но иногда и позже. Врач просит сдать анализ крови, несмотря на то, что тест отрицательный – почему? Врачу важно знать, произошла имплантация или нет, если бета ХГЧ менее 1,0 мЕД/мл то беременность не наступила, если же более 5,0; 18; 20 мЕД/мл и т.д. и во время поддержки вам не назначали препараты ХГЧ (от которых может быть следовая реакция), то это говорит, что эмбрион начал имплантироваться, но более не развился. И врач, будет вместе с вами искать причину неудачи.

Может ли вывалиться эмбрион, когда женщина встает с гинекологического кресла? Нет, репродуктивные органы женщины устроены так, что не позволяют «вываливаться» эмбриону, если он находится в полости матки.

Что происходит с эмбрионом в первые часы после переноса эмбриона в матку? Если наблюдать по УЗИ, то он перемещается в полости матки в поисках места для имплантации. Через 6-12 часов после переноса эмбриона, он вылупляется, внедряется в эндометрий и имплантируется. В полости матки за это время происходит множество биохимических и иммунологических процессов и если достигнуто равновесие, то наступает имплантация.

Криопротокол ЭКО в естественном цикле

Методика экстракорпорального оплодотворения согласно криопротокола, представляет собой один из наиболее эффективных методов альтернативного достижения физиологической беременности и получения запаса готовых эмбрионов.

Этот метод обладает рядом несомненных достоинств, что позволяет использовать его с целью помощи супружеским парам, которые испытывают затруднения при зачатии ребёнка. Удачный криопротокол в естественном цикле для таких семейных пар является панацеей.

Общие сведения

Очень часто женщин интересует вопрос о том, как проходит криопротокол в естественном цикле, и каковы особенности этой процедуры. Реализация криопротокола без гормональной стимуляции организма представляет собой наиболее щадящую методику с точки зрения безопасности для женского организма.

Эта методика предусматривает минимальное вмешательство в естественную среду организма женщины, однако для реализации этого процесса необходим медицинский специалист, обладающий высокой квалификацией и богатым врачебным опытом.

Естественный цикл

Криопротокол в естественном цикле предусматривает стимуляцию роста эндометрия и последующую имплантацию оплодотворенных яйцеклеток без дополнительной гормональной нагрузки на организм. Таким образом, медицинским специалистам удается достичь максимально естественных условий оплодотворения.

Если была выбрана методика ЭКО в естественном цикле, схема протокола является одинаковой для всех пациенток. Начиная с первого дня менструального цикла, специалист репродуктолог оценивает состояние слизистой оболочки полости матки (эндометрия), а также контролирует рост и развитие фолликула.

В ходе этого наблюдения, медицинские специалисты ведут оценку состояния гормонального фона в организме пациентки. Выводы о состоянии женского организма в определенный период менструального цикла основываются на данных, которые получены в результате ультразвукового исследования и биохимических тестов.

Особенности

Если женщину интересует криопротокол в естественном цикле и на какой день подсадка готового эмбриона считается нормальной, то эта манипуляция осуществляется в тот момент, когда у женщины наблюдается пиковая концентрация лютеинизирующего гормона. В течение 3 дней после этого явления медицинские специалисты осуществляют имплантацию готовых эмбрионов, возраст которых варьирует от 3 до 5 дней.

При всех своих положительных сторонах, криопротокол без гормональной стимуляции обладает перечнем недостатков. Главным препятствием на пути к эффективности методики является достоверность определения так называемого овуляторного пика. Ещё одним важным моментом является имплантационное окно в криопротоколе в естественном цикле, которое обеспечивает удачную имплантацию готового эмбриона в маточной полости.

Очень часто, медицинские специалисты принимают кисту желтого тела за доминантный фолликул, в результате чего последовательность всех методических манипуляций сводится к нулю. Перечисленные обстоятельства позволяют успешно использовать данную методику экстракорпорального оплодотворения при условии стабильности овуляторного цикла и у женщин молодого возраста.

Статистика

У женщин, которые изъявили желание воспользоваться методикой криопротокола без гормональной стимуляции, возникает множество вопросов, связанных с результативностью этого способа, влиянием на процесс вынашивания ребенка и его дальнейшее здоровье. Мнение специалистов репродуктологов в данном случае расходится.

О том, что эффективен криопротокол в естественном цикле, отзывы 2016 года говорят однозначно в положительном ключе. Среди тех, кто выполнил криопротокол в естественном цикле, статистика указывает на 70% успеха этого мероприятия, что является хорошим показателем. Криоперенос оплодотворенных яйцеклеток без гормональной стимуляции, является предпочтительным для женского организма во всех отношениях. Речь идёт об отсутствии массивной внешней нагрузки на внутреннюю среду.

Роды после успешного криопротокола в естественном цикле

Кроме того, криопротокол в естественном цикле никаких ощущений и дискомфорта не вызывает, что делает его более привлекательным способом экстракорпорального оплодотворения.

Еще одним актуальным вопросом является физическая и психоэмоциональная состоятельность тех детей, которые были зачаты при помощи методики экстракорпорального оплодотворения согласно криопротокола. Как показывает практика, эти малыши не отличаются в физическом и психологическом плане от своих сверстников, рожденных в результате естественного зачатия.

Эта статистика обусловлена тем, что процедура креативной заморозки оплодотворенных яйцеклеток отбирает наиболее жизнеспособных эмбрионов, которые обладают высоким потенциалом к успешной имплантации в полости матки с последующим ростом и развитием.

Важно помнить, что дети, зачатые посредством экстракорпорального оплодотворения, являются носителями набора генетической информации, которая была передана им от родителей. Именно поэтому, у таких малышей существует риск формирования наследственных заболеваний. Об этом говорит сам криопротокол в естественном цикле, его статистика и отзывы о данном вмешательстве.

В том случае, если имплантация готового эмбриона согласно криопротокола не завершилась наступлением физиологической беременности, у пациентки всегда есть возможность осуществить повторные попытки реализации данной цели.

Если женский организм будет не способен на это в условиях естественного менструального цикла, то медицинские специалисты воспользуются алгоритмами других протоколов экстракорпорального оплодотворения, которые предусматривают гормональную стимуляцию овуляторного цикла. Непосредственно криопротокол в естественном цикле и отзывы об этой процедуре создают благоприятную характеристику данного метода.

О процедуре (видео)

Поделиться:

Удачный криопротокол после неудачного ЭКО

Особенности программы ЭКО с использованием донорских яйцеклеток

Раньше, когда еще не удавалось провестикриоконсервацию яйцеклеток и эмбрионов, репродуктологи работали по «свежему» протоколу, менструальные циклы женщины-донора и реципиента (женщины, которая обратилась в клинику по причине бесплодия) синхронизировали. Что это значит? С началом менструации женщине-донору назначали гормональную терапию для стимуляции овуляции, женщина-реципиент начинала принимать препараты для подготовки эндометрия (внутреннего слоя матки) к беременности. Полученные в процессе пункции фолликулов яйцеклетки оплодотворяли спермой мужа. Культивирование эмбрионов длилось в среднем в течение 3–5 дней, после чего свежие эмбрионы переносили в матку женщине-реципиенту.

На сегодняшний день с успешным развитием криоконсервации потребность в достижении искусственной синхронизации циклов донора и реципиента полностью отсутствует.

Выживаемость эмбрионов после оттаивания при использовании криопротокола достигает 100 %

Сначала репродуктологи стимулируют овуляцию у женщины-донора, с помощью пункции производят забор содержимого фолликулов. После оплодотворения и культивирования эмбрионов до стадии бластоцисты их замораживают. Перенос проводят после подготовки эндометрия женщины к беременности, выбрав наиболее оптимальное для этого время.

Коррекция образа жизни перед ЭКО

Перед экстракорпоральным оплодотворением требуется не только прохождение анализов с консультацией врачей, но и изменение образа жизни.

Оба супруга должны пройти следующую подготовку:

  1. Отказаться от употребления алкогольных напитков и курения.
  2. Выпивать не более 1 чашки кофе в сутки.
  3. Стараться избегать перепадов температуры (посещения бань, саун).
  4. Провести терапию заболеваний, перешедших в хроническое течение.
  5. Нормализовать режим сна: нужно спать не менее 8-9 часов в день.
  6. Психологическая подготовка к ЭКО: создайте для себя комфортную обстановку. Врачи не рекомендуют много времени проводить в интернете, пытаясь найти информацию об экстракорпоральном оплодотворении.

Диета

Подготовка перед ЭКО включает в себя нормализацию питания и мужчины, и женщины. Для этого придется отказаться от жареной, жирной пищи, а также острых и сладких продуктов. Из рациона удаляют еду, содержащую консерванты или химические добавки.

Постарайтесь есть небольшими порциями по 5-6 раз в день

Если у вас имеется нарушение веса, неважно его повышение или снижение, необходимо нормализовать массу тела. От этого зависит гормональный фон

Чтобы диета была правильной и подходила вам, постарайтесь проконсультироваться с диетологом: врач подберет рацион.

Питье

При подготовке к экстракорпоральному оплодотворению вам придется употреблять около 2-3 литров воды в сутки при условии, что нет патологии почек и сердца. Такой объем жидкости очищает организм от токсинов, а во время гормональной терапии в ходе ЭКО помогает предупредить тяжелое и опасное осложнение – синдром гиперстимуляции яичников.

Лекарства

Во время подготовки перед экстракорпоральным оплодотворением врач назначает медицинские препараты, способствующие стимуляции технологии и благополучному исходу процедуры.

Для лечения многих заболеваний, связанных с мужским или женским бесплодием, применяется лекарственная трава – боровая матка. Чтобы женщина легче забеременела при экстракорпоральном оплодотворении, врачи выписывают Прегнотон, так как он улучшает функцию репродуктивной системы перед протоколом ЭКО.

Для нормализации гормонального фона, в также при незрелости эндометрия женщина принимает Фемостон. Показание к применению Регулона — коррекция менструального цикла, что поможет подготовиться к процедуре. Пациенткам, возраст которых превышает 40 лет, рекомендуют прием DHEA, который улучшает качество яйцеклеток.

Назначение Актовегина целесообразно, когда у пациентки в анамнезе наблюдается невынашивание беременности и гипоксия. Для регуляции обмена веществ и улучшения репродуктивной функции назначается Омега-3. Если женщина жалуется на повышенную нервозность в связи с предстоящей процедурой, врач назначает седативные препараты (Валерьянку, Пустырник).

Спорт

Если женщина займется плаваньем или ходьбой, они помогут ей укрепить организм перед экстракорпоральным оплодотворением. Считается, что восточные танцы весьма эффективны на этапе подготовки к процедуре. Дело в том, что при активных движениях животом и малым тазом, которые присущи восточным танцам, улучшается кровоснабжение органов репродуктивной системы, что повышает шансы на благоприятный исход имплантации эмбриона и последующее вынашивание крохи.

Вакцинация

Для защиты себя и будущего малыша от серьезных и опасных заболеваний врачи рекомендуют женщине сделать прививки от гепатита В, полиомиелита, краснухи, столбняка, гриппа и дифтерии. Вакцинация проводится не позднее 2-3 месяцев до проведения экстракорпорального оплодотворения.

Как подготовиться к ЭКО — алгоритм действий в видеоформате:

Немного о криопереносе эмбрионов: преимущества и недостатки

Что собой представляет криопротокол? Это та же процедура ЭКО, когда в матку подсаживают уже готовые эмбрионы, только они до этого были замороженными. Перед переносом их размораживают. Те, которые остаются живыми, переносятся в матку.

Как все в этом мире, репродуктивные криопроцедуры имеют свои достоинства и недостатки.

К преимуществам их относятся:

  • Необходимость в меньшем количестве гормональных препаратов, благодаря чему нагрузка на женский организм снижается (не требуется процедуры гиперстимуляции яичников для взятия яйцеклеток, т.к. уже есть готовые эмбрионы).
  • Значительно меньшая, по сравнению со «свежим» протоколом, стоимость процедуры.
  • Возможность проведения переноса эмбрионов даже через несколько лет (нет строгого ограничения во времени, что вот, через 2-3 дня процедура, и все).
  • Возможность избежать тяжелого синдрома гиперстимуляциии — это довольно опасное осложнение ЭКО, но в легкой степени встречается довольно часто.
  • Возможность нарастить эндометрий, если он тонкий. Имплантация эмбриона при толщине слизистой матки 7 мм составляет всего лишь 15%. Прибегая к криопротоколы шансы на имплантацию и вынашивание малыша стремительно растут.

Недостатком крио является меньшая выживаемость эмбрионов при заморозке-разморозке. Правда, эмбрионы, прошедшие такую серьезную «закалку», оказываются более жизнеспособными.

Большое значение имеет правильный подбор вида протокола и схемы его проведения. Делает это врач-репродуктолог строго индивидуально. Двух абсолютно одинаковых схем нет и не будет никогда.

Существует три вида проведения криопротоколов: в естественном цикле, на заместительной гормонотерапии (ЗГТ) и в стимулированном цикле. Самым гармоничным и не нагружающим женщину гормонами, дающим минимальную медикаментозную и психологическую нагрузку организму, является первый вариант.

Успешные криопротоколы есть во всех трех вариантах. Главное, чтобы выбран был наилучший для той или иной женщины.

Каким будет самочувствие женщины после криопереноса?

Спустя несколько часов после криопротокола женщину могут беспокоить метеоризм, вздутие живота, избыточное потоотделение. Подобные ощущения — реакция на гормональную терапию. Многие жалуются на то, что практически сразу начинает тянуть низ живота. Это происходит потому, что катетер, используемый при подсадке, нарушает естественный изгиб матки. Боли могут сохраняться в течение нескольких часов. Их устраняют путем приема дозы обезболивающего препарата.

Если очень тянет живот, врачи рекомендуют следующее:

  • отвлечься и не переживать;
  • совершать медленные прогулки в парке, у водоема;
  • устранить факторы стресса, которые могут стать причиной срыва;
  • принимать седативные препараты, больше спать и отдыхать;
  • при нестерпимой боли звонить доктору: случается, что организм отторгает плодное яйцо, и этот момент нельзя игнорировать.

Принцип проведения криопротокола после неудачного ЭКО

Чтобы в дальнейшем стало возможным проведение криопротокола после неудачного ЭКО, оставшиеся после процедуры эмбрионы подвергают криоконсервации. Для этой цели выбирают только качественные эмбрионы с признаками правильного развития. Как правило, после размораживания здоровыми остаются не менее 40% эмбрионов. Подготовительный этап перед проведением криопротокола после неудачного ЭКО значительно проще, чем перед стандартным протоколом ЭКО. В этом случае нагрузка на женский организм также будет минимальной. Наилучший вариант – это криопротокол после неудачного ЭКО, который был проведен в естественном цикле. В данном случае овуляция запускается без какой-либо дополнительной гормональной поддержки. Перенос эмбрионов в этом протоколе проводится только после того, как репродуктолог точно определил сроки овуляции. Как правило, подобный криопротокол после неудачного ЭКО лучше всего подойдет для молодых женщин, имеющих нормальный овуляторный цикл. Кроме того, после неудачного ЭКО возможно проведение криопротоколов на фоне вспомогательной терапии гормональными препаратами. Эта методика является более эффективной, поскольку здесь осуществляется дополнительная гормональная стимуляция организма.

Бесплатный прием репродуктолога в клинике «Центр ЭКО»
по 31 января 2020Осталось дней: 23

Уважаемые пациенты! Клиника «Центр ЭКО» приглашает вас на бесплатный прием репродуктолога с проведением УЗИ и составлением плана лечения.

Другие статьи

Что такое ЭКО в естественном цикле

Протокол ЭКО в естественном цикле (ЕЦ) – наиболее щадящая процедура из всех программ экстракорпорального оплодотворения.

Читать статью

ПГД при ЭКО. Что такое ПГД и для чего оно нужно

Многих потенциальных родителей, планирующих оплодотворение in vitro, занимает вопрос: ПГД при ЭКО – что это? В чем суть этой процедуры и так ли она важна и безопасна, как утверждают врачи?

Читать статью

Как подготовиться к ЭКО

Процедура довольно дорогостоящая и трудоемкая, вот почему перед экстракорпоральным оплодотворением проводится подготовительный период. Мужчина и женщина поэтапно исправляют образ жизни и проходят обследование. Последовательность мероприятий определяет лечащий врач.

Женщине

Начать подготовку к ЭКО следует с прохождения полного обследования. Представительнице слабого пола придется сдать большой список исследований, чтобы попытка переноса эмбриона окончилась успешно.

В такой перечень входит:

  1. Клинический анализ крови (содержание клеток крови, гемоглобина и СОЭ).
  2. Общий анализ мочи.
  3. Биохимический анализ крови.
  4. Гемостазиограмма.
  5. Анализ на гормоны (прогестерон и эстрогены в плазме, исследование АМГ, ФСГ).
  6. Мазок на флору.
  7. ПЦР-диагностика.
  8. Серологическое исследование антител к TORCH-инфекции, ВИЧ, гепатиту В, С.
  9. Анализ крови на RW.
  10. Мазок на онкоцитологию.
  11. Флюорография легких.
  12. ЭКГ.
  13. УЗИ органов малого таза, выполненное трансвагинально.
  14. Маммография.
  15. Кольпоскопия.
  16. Гистеросальпингография (для визуализации проходимости фаллопиевых труб).

Во время подготовки к процедуре женщины, страдающие общими заболеваниями, должны пройти консультацию профильных специалистов. При наличии у супружеской пары многократных выкидышей или замерших беременностей, детей с аномалиями развития или наследственными отклонениями назначают осмотр генетика. Доктор рекомендует сдачу анализа на кариотипирование – исследование качества и числа хромосом обоих партнеров.

Некоторые врачи советуют пройти процедуру плазмолифтинга, утверждая, что метод повышает успешность прикрепления эмбриона в ходе ЭКО и наступление беременности.

Мужчине

Для подготовки к экстракорпоральному оплодотворению представителям сильного пола придется сдавать следующие анализы:

Спермограмма: обратите внимание, что перед тестом воздержание от секса составляет 2-7 суток. Анализ крови на определение антител к ВИЧ, гепатиту В, С

Мазок из уретры на наличие половой инфекции. Анализ крови на RW. Цитологический анализ мазка из уретры на наличие атипичных и туберкулезных клеток. Ультразвуковое исследование органов мошонки, простаты. Анализ фрагментации ДНК сперматозоидов.

При наличии заболеваний мочеполовой системы мужчина идет на консультацию уролога и андролога.

Общее описание процедуры

При проведении стандартного протокола ЭКО у пациентки берут несколько зрелых яйцеклеток. Их оплодотворяют в пробирке, наблюдают за развитием и подсаживают в матку. Какой именно эмбрион выбрать, 3 или 5-дневный, решает репродуктолог. Обычно пересаживают 5-дневные эмбрионы в количестве от 1 до 4. При этом могут прижиться все оплодотворенные яйцеклетки, одна или несколько из них. Вероятность того, что ни один из эмбрионов не закрепится – около 50%.

Оставшиеся эмбрионы подвергают криоконсервации на 5-6 сутки после пункции (забора яйцеклеток). Это глубокая заморозка в жидком азоте при температуре -196 градусов. Замораживают двумя методами: постепенно за несколько часов либо в течение 15 минут. Второй способ более современный, он позволяет сохранить до 85% жизнеспособных эмбрионов.

Если первая попытка оказалась неудачной, используют замороженные зародыши, что позволяет избежать синдрома гиперстимуляции яичников

Важно, что эмбрионы могут сохраняться в замороженном виде бессрочно, и провести успешный перенос можно тогда, когда необходимо. Это возможно при условии правильного хранения и соблюдения пунктов протокола

Решение о том, когда делать криоперенос, принимает лечащий врач. Это может быть 3-5 день после овуляции (в естественном цикле) или 16-21 сутки цикла (при гормональном подавлении овуляции)

Важно при этом контролировать толщину эндометрия, иначе имплантация будет невозможна. Процесс могут сочетать с переносом не замороженного эмбриона

Благодаря медикаментозной поддержке, создаются благоприятные условия для имплантации и роста эмбриона. Факторы успеха – отсутствие кист яичника, патологий эндометрия и иных отклонений, которые могут помешать имплантации.

В процессе криопротокола выделяют:

  • этап разморозки оплодотворенных яйцеклеток и подготовки эндометрия;
  • перенос отобранных пятидневных эмбрионов под контролем ультразвукового датчика;
  • медикаментозное поддержание в посттрансферном периоде (например, блокада гипофиза).

Подготовка к криопереносу

На первом этапе пациентке потребуется сдать анализы, назначенные репродуктологом, пройти УЗИ для оценки функционирования яичников и состояния эндометрия. В установленный день осуществляется подсадка. Перед этим женщине не обязательно ночевать в клинике, можно подойти на процедуру в установленное время. Утром следует принять душ, отказавшись от гелей и мыла с ароматизаторами. Не нужно использовать лосьоны для тела, духи, эфирные масла. Лучше обойтись минимумом косметики.

За пару часов до подсадки следует опорожнить мочевой пузырь. В это же время нужно выпить 400-500 мл воды, чтобы в момент выполнения процедуры мочевой пузырь был умеренно наполнен. Легкий перекус разрешен за 3 часа до подсадки. Лучше подкрепиться порцией риса или тушеных овощей.

Криоперенос выполняют без анестезии, как и при обычном ЭКО. Его проводят в утренние часы, все манипуляции занимают около 10 минут. После вмешательства следует остаться в клинике. Врач скажет, сколько нужно лежать, проконсультирует пациентку и отправит домой. Остаток дня желательно провести в тишине и спокойствии.

Когда прибегают к использованию донорских яйцеклеток?

Донорские яйцеклетки применяют в следующих ситуациях:

  • Если женщина старше 40 лет. С возрастом у женщин резко снижается способность давать эмбрион с правильным набором хромосом. Вероятность рождения больного ребенка у возрастных женщин гораздо выше, чем в возрасте до 35 лет. Использование донорских ооцитов повышает успешность программы ЭКО, снижает вероятность выкидыша и рождения ребенка с наследственной патологией.
  • При выявлении истощения яичников. Снижение овариального резерва может быть следствием овариоэктомии (операции по удалению яичников), перенесенной химио- и/или лучевой терапии при лечении онкологических заболеваний. Раннее истощение яичников наблюдается и при некоторых генетических патологиях.
  • В случае диагностики у женщины наследственного заболевания. Бывают ситуации, когда женщина может быть фенотипически (внешне) здоровым носителем дефектного гена. Метод кариотипирования позволяет выявить число и структуру хромосом, благодаря чему удается обнаружить скрытое носительство. К заболеваниям, сцепленным с Х-хромосомой, относятся гемофилия, ихтиоз, миодистрофия Дюшена. Если мужчина здоров, а женщина – носитель Х-сцепленного заболевания, вероятность рождения в семье больного мальчика – 50 %, 50 % девочек будут здоровыми, а 50 % – носителями данной патологии. Использование донорских яйцеклеток снижает риск рождения больного ребенка.
  • При повторных неудачных попытках ЭКО. Отсутствие беременности при экстракорпоральном оплодотворении может быть связано с низким потенциалом к росту эмбрионов по причине неудовлетворительного качества полученных яйцеклеток.

Анонимные и неанонимные доноры яйцеклеток

Неанонимными донорами может стать дочь, сестра, близкие или дальние родственницы по линии жены. Плюсом неанонимного родственного донорства является общая генетика донора и реципиента. Также неанонимных доноров супружеская пара может найти самостоятельно по интернету. С одной стороны, в процессе знакомства женщина имеет возможность увидеть человека, узнать поближе, оценить внешние данные и личностные качества. Но неанонимность донора и пациента может стать и минусом, ведь многие пары не хотят, чтобы сторонние люди знали, в каком городе и в чьей семье родится ребенок, биологической матерью которого будет женщина-донор.

Основные причины неудач ЭКО

На сегодняшний день специалисты по репродуктивной медицине выделяют различные причины неудач ЭКО. В первую очередь, неудачное ЭКО может иметь место в таких ситуациях:

Низкое качество эндометрия, которое препятствует нормальной имплантации эмбриона. Именно отсутствие имплантации и делает протокол ЭКО неудачным. Чаще всего качество эндометрия снижается на фоне хронического эндометрита, который представляет собой воспаление внутреннего слоя матки. Также имплантация нарушается при наличии в матке полипов, миомы и других патологических состояний. Обследование после неудачного ЭКО должно быть направлено на поиск этих патологических процессов. Это позволит назначить лечение и подготовить эндометрий к повторной процедуре.
Патология маточных труб часто приводит к внематочной беременности или токсическому влиянию на эмбрион. Поэтому после неудачного ЭКО тщательно обследуют фаллопиевы трубы и при необходимости удаляют их.
Генетические дефекты являются одной из малоизученных причин неудачного ЭКО. В связи с этим обследование после неудачного ЭКО всегда включает кариотипирование пары. Если при этом выявлена патология, проводится предимплантационная диагностика. Ее нужно делать также и в том случае, если будет проводиться криопротокол после неудачного ЭКО.
Низкое качество эмбрионов зависит от возраста, наличия неблагоприятных факторов внешней среды, уровня соматического здоровья, а также факторов, связанных с профессионализмом сотрудников клиники.
Причины неудач ЭКО, связанные с нарушениями иммунной системы. Чтобы препятствовать этому фактору, необходимо провести исследование супружеской пары на HLA совместимость

Это особенно важно, если планируется проводить криопротокол после неудачного ЭКО.
Гормональный дисбаланс можно устранить путем приема гормональных препаратов, которые назначаются совместно репродуктологом и эндокринологом.
Возраст старше 35-40 лет считается одним из основных факторов, на фоне которого отмечается неудачное ЭКО.

Когда можно повторять попытку?

Вопрос, через сколько дней можно делать повторное ЭКО, не совсем корректен. В каждом конкретном случае устанавливаются индивидуальные сроки, которые зависят от самочувствия, состояния здоровья женщины и причин, по которым первый протокол оказался неудачным.

Наиболее распространенный срок, который женщине дается на восстановление, – три месяца. За это время женщина обычно успевает успокоиться после предыдущего поражения, обрести надежду и сделать все необходимые анализы и обследования.

Однако в случае если предыдущая попытка проводилась без гормональной стимуляции яичников, в , повторить попытку можно уже в следующем менструальном цикле, то есть через две недели.

После выкидыша и замершей беременности женщине обычно требуется больше времени на восстановление, поскольку в большинстве случаев такие ситуации требуют выскабливания полости матки. Сначала она должна пройти лечение антибиотиками и противовоспалительными препаратами, потом приступить к реабилитации и, наконец, к подготовке. Рекомендуемая в этом случае пауза — полгода.

Как вести себя после процедуры?

От того, как пройдут первые часы и дни после процедуры, во многом зависит успех подсадки. Репродуктологи советуют женщинам вести себя так:

  • избегать стрессов, волнений, умственных нагрузок и конфликтов;
  • настроиться на хорошее, заняться творчеством или любимым хобби, черпать в нем положительные эмоции;
  • окружить себя близкими людьми, избегать шумных компаний;
  • отвести несколько дней на спокойный отдых, больше лежать;
  • правильно питаться, соблюдать питьевой режим;
  • не поднимать тяжести;
  • принимать назначенные доктором поддерживающие препараты.

Горячая ванна, душ, сауна – табу после переноса. Нельзя делать резкие движения и наклоны, вступать в интимную близость до консультации с доктором. Образ жизни должен быть спокойным и размеренным

Важно выполнять предписания врача, своевременно приходить на осмотры.

Об успехе процедуры будет свидетельствовать имплантационное кровотечение (происходит спустя 2-3 суток после подсадки) и задержка менструации. На первых порах возможна тошнота, изменение вкусовых привычек, головокружения, обострения обоняния, иные ощущения.

Тест на беременность не покажет достоверный результат в течение первых недель. Через 14 дней после криопереноса нужно сдать кровь на анализ уровня ХГЧ. Во время первого УЗИ врачи оценят, где прикрепился эмбрион и проверят, не отстает ли он в развитии, соответствуют ли его параметры сроку беременности. Дальнейшие рекомендации и наблюдение медиков позволят выносить здорового и крепкого малыша.

4 причины предпочесть криоперенос “свежему” циклу

  1. ЭКО с криопереносом – это упрощенная программа лечения без индукции суперовуляции, избавляющая от риска СГЯ.
  2. Если в “свежем” цикле повышенный прогестерон в день введения ХГЧ может снизить восприимчивость эндометрия, то при криопереносе это не оказывает никакого влияния на шансы забеременеть.
  3. Криопрограммы не повышают пороков развития детей (по этому показателю криоперенос не отличается от “свежего” ЭКО-цикла).
  4. Крупнейший мета-анализ 2012 года, исследовавший 3152 криоцикла и 6308 “свежих”, выявил, что при криопереносе снижаются риски мертворождения, преждевременных родов, низкого веса ребенка и его подверженности болезням.

Техники подготовки эндометрия

Во время менструального цикла под воздействием меняющегося гормонального фона происходит ремоделирование эндометрия, как структурное, так и функциональное. В соответствии с этим, меняется и его восприимчивость к имплантации эмбрионов. Если все идет своим чередом, без сбоев, то имплантационное окно – состояние максимальной рецептивности слизистой матки – открывается примерно на 6-8 сутки после выброса ЛГ.

На какой день цикла делают криоперенос? Дата ключевой процедуры в ЭКО-программе должна приходиться на момент совпадения по времени развития эмбриона и эндометрия. Такая синхронизация существенно умножает шансы на беременность.

Маточный период

Эмбрион или несколько эмбрионов после имплантации ведут себя примерно одинаково и развиваются приблизительно с одинаковыми темпами.

Через две недели после эмбриопереноса женщина уже может узнать о своей беременности: ее покажет анализ крови, поскольку ХГЧ в плазме накопится в достаточном количестве. Через 21 день после переноса можно и нужно сделать первое УЗИ.

Все это время малыш будет стремительно расти. Когда мама придет сдавать кровь, у него уже будут сформированы все без исключения эмбриональные структуры, а еще через две недели начнет биться сердечко, этот трогательный момент можно пережить, сделав УЗИ в конце 6 недели беременности (это будет ровно в 4 недели после эмбриопереноса).

Развитие крохи по дням после ЭКО фактически повторяет весь эволюционный процесс, только изменения, которые происходили с человеком за десять тысяч лет, происходят с вашим эмбрионом за сутки. Женщина должна понимать, что и от ее образа жизни и соблюдения рекомендаций зависит, насколько успешным будет развитие зародыша в первые дни после подсадки.

Криопротокол после неудачного ЭКО

Криопротокол после неудачного ЭКО является отличным выходом из сложившейся ситуации. Он позволяет существенно уменьшить нагрузку на организм женщины во время проведения повторного ЭКО. При использовании криопротокола не проводится дополнительная стимуляции яичников и их пункция. Также в данном случае не проводится оплодотворение. Криопротокол после неудачного ЭКО исключает все эти этапы, поскольку они были проведены во время предыдущей процедуры экстракорпорального оплодотворения. При этом замораживаются эмбрионы, которые длительное время сохраняют свою жизнеспособность.

В настоящее время нет четких критериев, когда супружеская пара должна вступать в криопротокол после неудачного ЭКО. Решить этот вопрос сможет только квалифицированный репродуктолог, который проводил предыдущие протоколы ЭКО. Успешность этого протокола является абсолютно такой же, как и при стандартных программах ЭКО.

Дата: 8 января 2020

4 совета по успешной криоконсервации

Криоконсервация — это важная процедура, которая может помочь вам сохранить биологический материал в течение длительного периода времени. Хотя это очень эффективный метод, он включает в себя реагенты и методы, которые могут дать сбой, если не будут выполнены правильно. Целью криоконсервации является использование низких температур для сохранения структурно неповрежденных живых клеток/тканей. Необходимо наличие надлежащего оборудования для обеспечения согласованности, воспроизводимости и стерильности. Должен быть добавлен правильный выбор и количество криопротектора при правильной температуре, а перед стандартизированным методом криогенного хранения должна быть применена контролируемая скорость замораживания.Цель этого руководства — помочь вашим клеткам/тканям успешно пройти термодинамический путь от инкубатора с температурой 37°C до резервуара для хранения жидкого азота с температурой -196°C и жить долго и процветать.

Выберите подходящую среду


Первым шагом для обеспечения успешного сохранения клеток/тканей является поиск подходящей среды. Другими словами, вы должны убедиться, что используете правильную среду для своих клеток/тканей.

Криопротекторы

Криопротекторы защищают медленно замороженные клетки/ткани с помощью 4 механизмов: снижение высоких концентраций солей, уменьшение усадки клеток, уменьшение доли замороженного раствора и/или минимизация образования внутриклеточного льда.Комбинации криопротекторов могут приводить к аддитивному или синергетическому повышению выживаемости клеток. Глицерин, соли и диметилсульфоксид (ДМСО) являются наиболее часто используемыми криопротекторами. Образование льда можно исключить, если использовать криопротекторы в предельно высоких концентрациях, не менее 50% объем/объем.

Внутриклеточные криопротекторы с низкой молекулярной массой, которые проникают в клетки/ткани, такие как глицерин и ДМСО в концентрациях от 0,5 до 3 молярных, эффективны для сведения к минимуму повреждения клеток/тканей в медленно замороженных клетках/тканях.

Внеклеточные криопротекторы имеют более высокую молекулярную массу, большую, чем у сахарозы, которая не может проникать в клетки/ткани, как поливинилпирролидон и гидроксиэтилкрахмал. Эти соединения более эффективны для защиты биологических систем при быстром охлаждении, поскольку они вызывают витрификацию (образование внеклеточного стекла). В некоторых случаях в растворы для криоконсервации млекопитающих можно добавлять эмбриональную бычью сыворотку (ФБС), но она не является криопротектором.

Витрификация

«Витри» в переводе с греческого означает «стекло» и относится к образованию стеклоподобных структур внутри клеток/тканей.Действительно, витрификация — это превращение жидкости в стекло, и это затвердевание происходит из-за повышенной вязкости, а не из-за кристаллизации. Предотвращение замерзания требует, чтобы вода в ткани оставалась жидкой во время охлаждения, и это может быть достигнуто, если образцы витрифицированы, но хранятся при температуре стеклования или чуть ниже.

Блокаторы льда

Некоторые белки блокируют лед, так как они обладают антифризными свойствами; путем связывания с кристаллами льда таким образом, что кристаллизация льда подавляется.Были разработаны блокираторы синтетического льда, которые можно комбинировать с «натуральными» белками и обычными криопротекторами для улучшения сохранности клеток/тканей.

Среда для криоконсервации

Соответствующий криозащитный раствор может заменить физиологическую среду/среду, в которую были помещены клетки/ткань. Буферная среда должна содержать специальные криопротекторы, необходимые для минимизации травм, вызванных замораживанием.

В фазе предварительного замораживания клетки/ткани следует подвергать охлаждению с целью замедления метаболизма, минимизации ишемических и гипоксических изменений и снижения химической токсичности криопротекторов.

Образцы могут быть упакованы в предварительно охлажденный криозащитный раствор от 0°C до 4°C, а затем перенесены в аналогично предварительно охлажденную камеру для криоконсервации. Другой вариант — использовать морозильную камеру с регулируемой скоростью. На этом этапе вы должны принять во внимание, что обычные среды для культивирования тканей, используемые для выращивания клеток/тканей при физиологических температурах, могут не подходить для воздействия при низких температурах. Быстрое охлаждение может быть вредным из-за теплового удара, поэтому сохранение ионного и гидравлического баланса в тканях во время охлаждения можно лучше контролировать в средах, предназначенных для физического ограничения этих вызванных температурой дисбалансов.Оптимальные растворы должны корректировать ионный баланс и повышать осмоляльность.

В настоящее время готовые решения, такие как CryoStemTM, являются наиболее надежными, простыми в использовании и безопасными вариантами. Некоторые преимущества использования таких решений включают в себя: не содержат белка, работают с различными средами, подходят для замораживания клеток, культивируемых как в условиях фидера, так и без фидера, и доказали высокую эффективность восстановления клеток человека. CryoStemTM также содержит метилцеллюлозу и ДМСО вместо сыворотки, что устраняет риски, связанные с сывороткой животных и продуктами, полученными из сыворотки.

Для некоторых препаратов/клеток могут потребоваться дополнительные составы. Всегда читайте полное описание и рекомендации реагентов, которые вы будете использовать.

Скорость охлаждения

Скорость охлаждения может оказывать существенное влияние на выживаемость клеток. Запрограммированные и равномерные скорости охлаждения имеют решающее значение для эффективного длительного хранения и максимизации жизнеспособности клеток/тканей.

Скорость охлаждения можно регулировать в пределах от 4°C до -40°C. Поддержание равномерности охлаждения во всех образцах также очень важно, и некоторые устройства впрыскивают и распределяют жидкий азот в камеру с помощью внутреннего вентилятора, сводя к минимуму стандартное отклонение менее 2°C во время цикла.Оптимальные условия медленного охлаждения, приводящие к сохранению жизнеспособности клеток, определяются скоростью охлаждения, которая допускает некоторую дегидратацию клеток без образования значительного количества внутриклеточного льда.

Для некоторых клеток млекопитающих оптимальная скорость охлаждения составляет от 0,3°C до 10°C в минуту. Каждый тип клеток имеет замораживающую «рамку», в которой скорость охлаждения обеспечивает оптимальную выживаемость клеток.

Проверьте оборудование и метод заморозки


Убедитесь, что у вас есть подходящее оборудование и соответствующий метод заморозки.

Основное преимущество оборудования для замораживания с контролируемой скоростью заключается в том, что сохранение контролируемой скорости для высвобождения скрытого тепла приводит к повышению жизнеспособности клеток после криоконсервации.

Наиболее часто используемые методы: методы с жидким азотом, прямая обратная связь по температуре, синхронизированный импульс, погружение в жидкий азот или глубокое замораживание, а также метод понижения температуры. Жидкий азот является одним из лучших вариантов, поскольку он химически инертен, негорюч и относительно дешев.

Метод прямой обратной связи по температуре работает путем подачи жидкого азота в камеру и контроля температуры образца при сравнении фактической температуры с запрограммированной температурой камеры, а также автоматически настраивается на подачу жидкого азота низкого давления, скорость замораживания или неисправные электромагнитные клапаны.

В методе Timed Pulse количество впрыскиваемого жидкого азота определяется размером клапана, давлением в резервуаре, износостойкостью сердечника клапана и количеством открытий соленоида, определяемым запрограммированной скоростью замерзания температуры.

При погружении в жидкий азот или глубоком замораживании образцы загружаются в нагревательный блок, и этот блок погружается в азот. Затем нагреватель охлаждает азот, чтобы получить контролируемую скорость замораживания. Рекомендуется для небольшого количества соломинок и флаконов небольшого объема.

В методе замораживания Step Down образцы помещают в холодильник на ночь, переносят в морозильную камеру при температуре -70°C на определенный период времени, а затем помещают в пары азота.

Протоколы замораживания

Рекомендуется оптимизировать протокол замораживания для тестирования ваших клеток/тканей в разное время и при разных температурах, чтобы определить шаги, необходимые для получения желаемого уровня жизнеспособности клеток или функции ткани. Производители выбранного устройства или носителя могут порекомендовать протоколы или программы, обеспечивающие приемлемую жизнеспособность, и они являются хорошей отправной точкой.

Обычно используемый протокол для образца размером 2 мл предполагает скорость 1°C от зародышеобразования до -40°C и скорость охлаждения 10°C в минуту до конечной температуры -90°C.

Хранение криоконсервированных образцов

Как правило, чем ниже температура, тем дольше срок жизнеспособности. Некоторые образцы могут храниться при температуре -70°C месяцами или годами, но химические реакции, ответственные за разрушение клеток, при этой температуре полностью не останавливаются. Образцы при температуре ниже -130°C могут храниться тысячелетиями.

Фазы хранения

Образцы могут храниться в паровой или жидкой фазе. Хранение в жидкой фазе обеспечивает постоянную температуру -196°C. Недостатки этого метода заключаются в том, что используемые упаковочные материалы (криопробирки) могут протечь и позволить жидкому азоту попасть в упаковку, а поскольку азот расширяется до газа при нагревании, это может привести к взрыву, если только газу не будет позволено выйти при утечке. образцы восстановлены. Совет: немедленное открытие крышки флакона для снижения давления снижает эту угрозу.

Хранение в паровой фазе обеспечивает температурный градиент, а не постоянную температуру. Хранение в паровой фазе снижает вероятность перекрестного загрязнения, но не имеет такого большого запаса безопасности с точки зрения времени хранения.

Система хранения или контейнер

Основными четырьмя факторами для выбора наилучшего контейнера являются стоимость (цена, качество, гарантия), расход (в виде скорости потери жидкого азота), вместимость образца и контроль (температура, автозаполнение и мониторинг).

Безопасность и контроль качества


Поскольку газообразный азот не имеет цвета, запаха и вкуса, он не может быть обнаружен органами чувств человека и может вызвать головокружение, потерю сознания и смерть.

Неправильно запечатанные контейнеры могут взорваться. Помещение контейнеров в паровую фазу азота на несколько часов перед погружением их в жидкий азот сводит к минимуму риск взрыва.

Риска загрязнения образца и пользователя опасными образцами можно избежать, открыв контейнер в безопасном шкафу.

Рекомендации по безопасности Пользователи должны носить защитное покрытие для лица, изолированные перчатки и одежду с длинными рукавами, чтобы предотвратить воздействие жидкого азота. Всегда используйте контейнеры, предназначенные для низкотемпературных жидкостей, не закрывайте и не препятствуйте выходу жидкого азота. Используйте твердые стержни в качестве мерных стержней, используйте жидкий азот только в хорошо проветриваемых помещениях и не переполняйте контейнеры. Должны быть разработаны протоколы обеззараживания для немедленных корректирующих действий. Всегда обновляйте информацию о каждом штативе, коробке и лунке со всей информацией об образце: тип, дата, ответственное лицо и т. д.

Протокол восстановления


Одна из основных проблем заключается в том, как вернуть клетки/ткани к жизни в наилучшей форме. В случае эмбрионов млекопитающих медленное нагревание необходимо для выживания, поскольку оно дает достаточно времени для регидратации клеток и постепенной потери накопленных растворов. В криоконсервированных клетках, которые нагреваются медленно, маленькие ядра кристаллов льда имеют тенденцию расти путем перекристаллизации, вызывая повреждение клеток. Клетки могут пережить быстрое оттаивание, потому что при быстром охлаждении они накопили относительно мало растворенного вещества, а рекристаллизация практически не имеет возможности произойти при быстром нагревании.Надлежащая практика постепенного разбавления криопротектора через соответствующие промежутки времени для поддержания объема клеток ниже порога повреждения и разбавления криопротектора в присутствии не проникающего растворенного вещества (сахарозы) предотвращает набухание клеток по мере диффузии растворенных веществ из клеток. .

Ссылки
  1. Нишияма Ю., Иванами А., Кохяма Дж., Итакура Г., Кавабата С., Сугай К., Нисимура С., Кашиваги Р., Ясутакэ К. ., Исода М., Мацумото М., Накамура М.и Окано, Х. «Безопасный и эффективный метод криоконсервации индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток, полученных из нейральных стволовых клеток и клеток-предшественников, с помощью программируемой морозильной камеры с магнитным полем». Неврологические исследования, том 107, июнь 2016 г., страницы 20–29 https://doi.org/10.1016/j. neures.2015.11.011 
  2. Имаидзуми К., Нисишита Н., Мурамацу М., Ямамото Т., Такенака К., Кавамата С., Кобаяси К., Нисикава С., Акута Т. «Простой и высокоэффективный метод медленно замораживание плюрипотентных стволовых клеток человека с использованием диметилсульфоксида, гидроксиэтилкрахмала и этиленгликоля» PLOS ONE, 9 (2014), с.e88696
  3. Брокбанк, К. Г. М. «Основы криобиологии». В принципах аутологичной, аллогенной и криоконсервированной венозной трансплантации. (Ed. KGM Brockbank), RG Landes Company, Austin, TX (Medical Intelligence Unit Series) Springer-Verlag, 91-102, 1995.
  4. Brockbank, KGM «Метод криоконсервации кровеносных сосудов». Патент США 5 145 769 и патент 5 158 867, 1992 г.
  5. Уиттингем, Д. Г., С. П. Лейбо и П. Мазур. «Выживание эмбрионов мышей, замороженных до -196°С и -269°С.” Science, NY 178: 411-14, 1972. 
  6. Wolfinbarger L., M. Adam, P. Lange, and J.F. Hu. «Микропереломы в криоконсервированных сердечных клапанах: новый взгляд на погружение клапана в жидкий азот». Applications of Cryogenic Technology, Plenum Press, 10: 227-233, 1991.


Спонсор:

Зима близко: будущее криоконсервации | BMC Biology

  • Love R. Chillin’ на симпозиуме с Платоном: охлаждение в древнем мире. АШРАЭ Транс.2009; 115:106.

    КАС Google ученый

  • Бойл Р. Новые эксперименты и наблюдения, касающиеся холода. Лондон: Дж. Крук; 1665.

    Google ученый

  • Coriell LL, Greene AE, Silver RK. Историческое развитие замораживания культур клеток и тканей. Криобиология. 1964; 1 (1): 72–9.

    Артикул Google ученый

  • Лавлок Дж. Э., Бишоп М. В.Предотвращение замерзания живых клеток диметилсульфоксидом. Природа. 1959; 183 (4672): 1394–1395.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Лавлок Дж. Э. Механизм защитного действия глицерина от гемолиза при замораживании и оттаивании. Биохим Биофиз Акта. 1953; 11 (1): 28–36.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Мазур П.Кинетика потери воды клетками при отрицательных температурах и вероятность внутриклеточного замерзания. J Gen Physiol. 1963; 47 (2): 347–69.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Wowk B. Как работают криопротекторы. крионика. 2007; 28:3.

    Google ученый

  • Takamatsu H, Zawlodzka S. Вклад образования внеклеточного льда и эффектов раствора в повреждение от замораживания клеток PC-3, взвешенных в растворах NaCl.Криобиология. 2006;53(1):1–11.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Персидский мкр. Лизосомы как первичные мишени криотравмы. Криобиология. 1971; 8 (5): 482–8.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Уэсли-Смит Дж., Уолтерс С., Памментер Н.В., Берджак П. Почему внутриклеточный лед смертелен? Микроскопическое исследование, демонстрирующее доказательства запрограммированной гибели клеток в подвергнутых криогенному воздействию эмбриональных осях рекальцитрантных семян Acer saccharinum.Энн Бот. 2015;115(6):991–1000.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Ю. Г., Яп Ю. Р., Поллок К., Хьюбел А. Характеристика образования внутриклеточного льда лимфобластов с помощью низкотемпературной рамановской спектроскопии. Biophys J. 2017;112(12):2653–63.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Фуллер Б.Дж., Лейн Н., Бенсон Э.Е.Жизнь в замороженном состоянии. Бока-Ратон: CRC Press; 2004.

    Книга Google ученый

  • Секи С., Мазур П. Влияние скорости нагревания на выживаемость витрифицированных ооцитов мыши и на рекристаллизацию внутриклеточного льда. Биол Репрод. 2008;79(4):727–37.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Гроут Б., Моррис Дж., Маклеллан М.Криоконсервация и поддержание клеточных линий. Тенденции биотехнологии. 1990;8(10):293–7.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Эллиот Г.Д., Ван С., Фуллер Б.Дж. Криопротекторы: обзор действия и применения криозащитных растворов, которые модулируют восстановление клеток при сверхнизких температурах. Криобиология. 2017;76:74–91.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Лучший БП.Токсичность криопротекторов: факты, проблемы и вопросы. Омоложение Рез. 2015;18(5):422–36.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Polge C, Smith AU, Parkes AS. Оживление сперматозоидов после витрификации и обезвоживания при низких температурах. Природа. 1949;164(4172):666.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Льюис Дж.К., Бишоф Дж.К., Браславски И., Брокбанк К.Г., Фэйи Г.М., Фуллер Б.Дж., Рабин Ю., Токкио А., Вудс Э.Дж., Вовк Б.Г. и др.Большие проблемы банка органов: материалы первого глобального саммита по сложной криоконсервации тканей. Криобиология. 2016;72(2):169–82.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • ВОЗ: Сохранение почек. Bull World Health Organization 2012, 90(10):718–719.

  • Ардехали А. 1. Хотя миллионы и миллионы жизней были спасены, трансплантация органов по прошествии 50 лет все еще сталкивается с огромными проблемами; сохранение органов является большой частью решения.Криобиология. 2015;71(1):164–5.

    Артикул Google ученый

  • Ибрагим М., Вейс Г., Мехью Дж., Джонсон Р., Форсайт Дж., Классен Д., Каллаган С., Стюарт Д. Международное сравнение использования почки умершего донора: чему Соединенные Штаты и Соединенное Королевство могут научиться друг у друга ? Am J транспл. 2020;20(5):1309–22.

    Артикул Google ученый

  • Риз П.П., Хархай М.Н., Абт П.Л., Левин М.Х., Халперн С.Д.Новые решения для сокращения выбраковки почек, донорских для трансплантации. J Am Soc Нефрол. 2016;27(4):973–80.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Использование органов до 2020 года [https://www.odt.nhs.uk/odt-structures-and-standards/key-strategies/taking-organ-utilisation-to-2020/].

  • Israni AK, Zaun D, ​​Bolch C, Rosendale JD, Schaffhausen C, Snyder JJ, Kasiske BL: Годовой отчет OPTN/SRTR 2015: донорство органов умерших.Am J Transplantation 2017, 17 Suppl 1: 503–542.

  • Гива С., Льюис Дж.К., Альварес Л., Лангер Р., Рот А.Е., Черч Г.М., Маркманн Дж.Ф., Сакс Д.Х., Чандракер А., Вертхайм Дж.А. и др. Обещание сохранения органов и тканей изменить медицину. Природные биотехнологии. 2017;35(6):530–42.

    КАС Статья Google ученый

  • Уорд А, Классен Д.К., Франц К.М., Гива С., Льюис Дж.К. Социальные, экономические и политические последствия достижений в области сохранения органов.Текущее мнение Трансплантация органов. 2018;23(3):336–46.

    Артикул Google ученый

  • Hosenpud JD, Edwards EB, Lin HM, Daily OP. Влияние соответствия HLA на результаты торакальной трансплантации. Анализ торакального регистра UNOS/ISHLT. Тираж. 1996; 94(2):170–4.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Чен Р., Ван Б., Лю И, Линь Р., Хе Дж., Ли Д.Исследование криогенных тканеинженерных срезов печени в геле альгината кальция для тестирования на наркотики. Криобиология. 2018;82:1–7.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Пичугин Ю., Фахи Г. М., Морин Р. Криоконсервация срезов гиппокампа крыс методом витрификации. Криобиология. 2006;52(2):228–40.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Ли М., де Грааф И.А., Грутуис Г.М.Прецизионные срезы кишечника: альтернативная модель для исследования транспорта, метаболизма и токсикологии лекарств. Экспертное заключение Метаболизм лекарственных средств Toxicol. 2016;12(2):175–90.

    КАС Статья Google ученый

  • де Грааф И.А., Драайсма А.Л., Шуман О., Фэйи Г.М., Грутуис Г.М., Костер Х.Дж. Криоконсервация прецизионных срезов печени и почек крыс путем быстрого замораживания и витрификации. Криобиология. 2007;54(1):1–12.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • де Грааф И.А., Костер Х.Ю.Криоконсервация прецизионных срезов тканей для применения в исследованиях метаболизма лекарств. Токсикол в пробирке. 2003;17(1):1–17.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Траски, Джорджия. Микрофизиологические системы и органоиды человека как модели in vitro для токсикологических исследований. Фронт общественного здравоохранения. 2018;6:185.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Sandow N, Kim S, Raue C, Päsler D, Klaft ZJ, Antonio LL, Hollnagel JO, Kovacs R, Kann O, Horn P, et al.Лекарственная устойчивость в срезах коры и гиппокампа из резецированной ткани пациентов с эпилепсией: значимого влияния р-гликопротеина и белков, связанных с множественной лекарственной устойчивостью, не выявлено. Фронт Нейрол. 2015;6:30.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Лю Ф., Хуан Дж., Нин Б., Лю З., Чен С., Чжао В. Открытие лекарств с помощью органоидов стволовых клеток человеческого происхождения. Фронт Фармакол. 2016;7:334.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • ДиМаси Дж.А., Грабовски Х.Г., Хансен Р.В.Инновации в фарминдустрии: новые оценки затрат на НИОКР. J Экономика здравоохранения. 2016;47:20–33.

    Артикул Google ученый

  • Taylor MJ, Weegman BP, Baicu SC, Giwa SE. Новые подходы к криоконсервации клеток, тканей и органов. Трансфузионная медицинская гемотерапия. 2019;46(3):197–215.

    Артикул Google ученый

  • Jang TH, Park SC, Yang JH, Kim JY, Seok JH, Park US, Choi CW, Lee SR, Han J.Криоконсервация и ее клиническое применение. Интегр Мед Рез. 2017;6(1):12–8.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Мазур П. Роль внутриклеточного замораживания в гибели клеток, охлаждаемых сверхоптимальными скоростями. Криобиол. 1977;14(3):251–72.

    КАС Статья Google ученый

  • Наврот Ф., Исаченко В., Дессоле С., Рахими Г., Фарина М., Варгиу Н., Маллманн П., Даттена М., Капобьянко Г., Петерс Д. и др.Витрификация сперматозоидов человека без криопротекторов. Крио письма. 2002;23(2):93–102.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Сформо Т., Уолтерс К., Жаннет К., Вовк Б., Фэйи Г.М., Барнс Б.М., Думан Д.Г. Глубокое переохлаждение, витрификация и ограниченная выживаемость до -100°C у личинок аляскинского жука Cucujus clavipes puniceus (Coleoptera: Cucujidae). J Эксперт Биол. 2010;213(3):502–9.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Курбьер Б., Одагеску В., Бодо А., Массардье Дж., Мазойер К., Салле Б., Лорнаж Дж.Криоконсервация яичника путем витрификации как альтернатива протоколам медленного охлаждения. Фертильность Бесплодие. 2006; 86 (4 Приложение): 1243–51.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Fahy GM, Wowk B. Принципы безледовой криоконсервации путем витрификации. Методы Мол Биол. 2021;2180:27–97.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Фэйи ГМ.Нейтрализация токсичности криопротекторов. Криобиология. 2010;60(3 Приложение):S45–53.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Аль-Азави Т., Тавуккуоглу С., Хаки А.А., Аль Хасани С. Криоконсервация ооцитов, зигот, эмбрионов и бластоцист человека: сравнительное исследование методов медленной заморозки и сверхбыстрой (витрификации). Ближневосточное общество фертильности J. 2013;18(4):223–32.

    Артикул Google ученый

  • Клоке С., Бюндген Н., Кёстер Ф., Айхенлауб-Риттер У., Гризингер Г.Медленное замораживание и витрификация для криоконсервации ткани яичника человека. Архивы Гинеколь Акушерства. 2015;291(2):419–26.

    КАС Статья Google ученый

  • Kroener C, Luyet B. Образование трещин при стекловании растворов глицерина и исчезновение трещин при повторном нагревании. Биодинамика. 1966; 10 (198): 47–52.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Fahy GM, Saur J, Williams RJ.Физические проблемы при витрификации больших биологических систем. Криобиология. 1990;27(5):492–510.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Сарагусти Дж. Направленная заморозка для криоконсервации больших объемов. Методы Мол Биол. 2015;1257:381–97.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Бахари Л., Бейн А., Яшунский В., Браславский И.Направленное замораживание для криоконсервации прикрепленных клеток млекопитающих на субстрате. ПЛОС Один. 2018;13(2):e0192265.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Арав А., Фридман О., Натан Й., Гур Э., Шани Н. Криоконсервация и трансплантация задних конечностей крыс: шаг к «банкингу органов». Am J Трансплантация. 2017;17(11):2820–8.

    КАС Статья Google ученый

  • Гавиш З., Бен-Хаим М., Арав А.Криоконсервация цельной мышиной и свиной печени. Омоложение Рез. 2008;11(4):765–72.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Арав А., Натан Д.: Направленное замораживание репродуктивных клеток и органов. Размножение домашних животных = Zuchthygiene 2012, 47 Suppl 4:193–196.

  • Мазур П. Замораживание живых клеток: механизмы и последствия. Am J Phys. 1984; 247 (3 часть 1): C125–42.

    КАС Статья Google ученый

  • Пегг, Германия. Принципы криоконсервации. Методы Мол Биол. 2007; 368: 39–57.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Steif PS, Palastro MC, Rabin Y. Влияние температурных градиентов на развитие стресса во время криоконсервации посредством витрификации. Технология сохранения клеток.2007;5(2):104–15.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Такахаши Т., Хирш А., Эрбе Э., Уильямс Р.Дж. Механизм криозащиты внеклеточными полимерными растворами. Биофиз Дж. 1988; 54 (3): 509–18.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Асахина Э., Шимада К., Хисада Ю. Стабильное состояние замороженной протоплазмы с невидимыми внутриклеточными кристаллами льда, полученное путем быстрого охлаждения.Разрешение ячейки опыта. 1970; 59(3):349–58.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Соланки П.К., Бишоф Дж.К., Рабин Ю. Анализ термомеханического стресса при криоконсервации в криопакетах и ​​потенциальные преимущества нанопотепления. Криобиология. 2017;76:129–39.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Manuchehrabadi N, Gao Z, Zhang J, Ring HL, Shao Q, Liu F, McDermott M, Fok A, Rabin Y, Brockbank KG и др.: Улучшенная криоконсервация тканей с использованием индукционного нагрева магнитных наночастиц.Science Transl Med 2017, 9(379).

  • Вустеман М., Робинсон М., Пегг Д. Витрификация крупных тканей с диэлектрическим прогревом: биологические проблемы и некоторые подходы к их решению. Криобиология. 2004;48(2):179–89.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Руггера П.С., Фахи Г.М. Быстрый и равномерный электромагнитный нагрев водных растворов криопротекторов от криогенных температур.Криобиология. 1990;27(5):465–78.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Burdette EC, Wiggins S, Brown R, Karow AM. Размораживание замороженных почек в микроволновой печи: теоретически обоснованный экспериментально-эффективный дизайн. Криобиология. 1980;17(4):393–402.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Вок Б., Коррал А.023 Адаптация промышленного диатермического аппарата для радиочастотного нагрева витрифицированных органов. Криобиология. 2013;67(3):404.

    Артикул Google ученый

  • Этеридж М.Л., Сюй Ю., Чой Дж., Бишоф Дж.К. 003 Радиочастотный нагрев растворов криопротекторов с магнитными наночастицами для улучшения протоколов криоконсервации. Криобиология. 2013;67(3):398–9.

    Артикул Google ученый

  • Фэйи Г.041 Последствия и контроль образования льда во внутреннем мозговом веществе почек. Криобиология. 2013;67(3):409–10.

    Артикул Google ученый

  • Эванс С., Рахман М.Дж., Пегг Д.Е. Дизайн аппликатора УВЧ для согревания криоконсервированных биоматериалов. IEEE Trans Biomed Eng. 1992;39(3):217–25.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Робинсон М.П., ​​Вустеман М.С., Ван Л., Пегг, Д.Э.Электромагнитный прогрев криоконсервированных тканей: влияние выбора криопротектора и формы образца на равномерность прогрева. Физика Медицина Биол. 2002;47(13):2311–25.

    Артикул Google ученый

  • Вали Г.: — Зарождение льда — обзор. В: Nucleation and Atmospheric Aerosols 1996. Под редакцией Kulmala M, Wagner PE. Амстердам: Пергамон; 1996: 271–279.

  • Петерсен А., Шнайдер Х., Рау Г., Гласмахер Б.Новый подход к замораживанию водных растворов при активном контроле температуры зародышеобразования. Криобиология. 2006;53(2):248–57.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Волкерс В.Ф., Баласубраманян С.К., Онгстад ​​Э.Л., Зек Х.К., Бишоф Дж.К. Влияние замораживания на мембраны и белки в клетках опухоли предстательной железы LNCaP. Биохим Биофиз Акта. 2007;1768(3):728–36.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Джон Моррис Г., Эктон Э.Контролируемая нуклеация льда при криоконсервации – обзор. Криобиология. 2013;66(2):85–92.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Далви-Исфахан М., Хамдами Н., Ксантакис Э., Ле-Бейл А. Обзор контроля образования кристаллов льда с помощью ультразвуковых волн, электрических и магнитных полей. Дж. Пищевая инженерия. 2017;195:222–34.

    Артикул Google ученый

  • Моррис Г.Дж., Актон Э., Фасцер К., Франклин А., Инь Х., Бодин Р., Пареха Дж., Занинович Н., Госден Р.Криоконсервация мышиных эмбрионов, сперматозоидов человека и эмбриональных стволовых клеток с использованием безжидкого азота в морозильной камере с регулируемой скоростью. Репродуктивная биомедицина онлайн. 2006;13(3):421–6.

    КАС Статья Google ученый

  • König O, Rechsteiner P, Trusch B, Andreoli C, Hulliger J. Оборудование для контроля зарождения и подбора размера монокристаллов, выращенных в растворе. J Прикладная кристаллография. 1997;30(4):507–9.

    Артикул Google ученый

  • Браславский И., Липсон С.Г.Эффект электрозамораживания и зарождение кристаллов льда в экспериментах по свободному росту. Appl Phys Lett. 1998;72(2):264–6.

    КАС Статья Google ученый

  • Хан Х., Ма Х.Б., Уилсон С., Крицер Дж.К. Влияние наночастиц на температуры зародышеобразования и расстеклования растворов криопротекторов полиолов. Микрофлюидика Нанофлюидика. 2007;4(4):357.

    Артикул КАС Google ученый

  • Маргаритис А., Басси А.С.Принципы и биотехнологические применения нуклеации бактериального льда. Критический обзор биотехнологий. 1991;11(3):277–95.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Anastassopoulos E. Анализ замораживания чашек с агаром для селекции in situ трансформированных бактерий, образующих ядра льда. Криобиология. 2006;53(2):276–8.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Лундхейм Р.Физиологическое и экологическое значение нуклеаторов биологического льда. Philos Trans R Soc Lond Ser B Biol Sci. 2002;357(1423):937–43.

    КАС Статья Google ученый

  • Захариассен К.Е., Кристиансен Э. Зарождение и антинуклеация льда в природе. Криобиология. 2000;41(4):257–79.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Чоу Р., Блиндт Р., Чиверс Р., Пови М.Сонокристаллизация льда в растворах сахарозы: первичная и вторичная нуклеация. Ультразвук. 2003;41(8):595–604.

    КАС Статья Google ученый

  • Линдингер Б., Меттин Р., Чоу Р., Лаутерборн В. Кристаллизация льда, вызванная оптическим пробоем. Phys Rev Lett. 2007;99(4):045701.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Шпиндлер Р., Волкерс В.Ф., Гласмахер Б.Диметилсульфоксид и этиленгликоль способствуют фазовому переходу мембраны во время криоконсервации. Крио письма. 2011;32(2):148–57.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Kharasch N, Thyagarajan BS. Структурные основы биологической активности диметилсульфоксида. Энн Н.Ю. Академия наук. 1983; 411: 391–402.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Аракава Т., Тимашев С.Н.Преимущественные взаимодействия белков с компонентами растворителя в водных растворах аминокислот. Арх Биохим Биофиз. 1983; 224(1):169–77.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Мантри С., Канунго С., Мохапатра ПК. Криопротекторное действие дисахаридов на стволовые клетки пуповинной крови при минимальном использовании ДМСО. Переливание крови Indian J Hematol. 2015;31(2):206–12.

    Артикул Google ученый

  • Хьюбель А., Дарр Т.Б., Чанг А., Данциг Дж.Разделение клеток при направленном отверждении растворов трегалозы. Криобиология. 2007;55(3):182–8.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Бауст Дж.Г., Гао Д., Бауст Дж.М. Криоконсервация: новое изменение парадигмы. Органогенез. 2009;5(3):90–6.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Ок С.А., Ро Г.Дж.Влияние диметилсульфоксида (ДМСО) на криоконсервацию свиных мезенхимальных стволовых клеток (пМСК). Трансплантация клеток. 2011;20(8):1231–9.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Баккен А.М. Криоконсервация клеток-предшественников периферической крови человека. Текущая терапия исследования стволовых клеток. 2006;1(1):47–54.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Гесс Р., Бартельс М.Дж., Поттенгер Л.Х.Этиленгликоль: оценка допустимых уровней воздействия на основе обзора данных о животных и людях. Архивы Токсикол. 2004;78(12):671–80.

    КАС Статья Google ученый

  • Аракава Т., Кита Ю., Тимашев С.Н. Осаждение и денатурация белков диметилсульфоксидом. Биофиз хим. 2007;131(1–3):62–70.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Лай Д., Дин Дж., Смит Г.В., Смит Г.Д., Такаяма С.: Медленная и неуклонная усадка клеток снижает осмотический стресс при витрификации ооцитов быка и мыши и зигот.Репродукция человека (Оксфорд, Англия) 2015, 30(1):37–45.

  • Fahy GM, Wowk B, Pagotan R, Chang A, Phan J, Thomson B, Phan L. Физические и биологические аспекты витрификации почек. Органогенез. 2009;5(3):167–75.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Fahy GM, MacFarlane DR, Angell CA, Meryman HT. Витрификация как метод криоконсервации. Криобиология. 1984;21(4):407–26.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Ролл WF. Факторы, влияющие на выживаемость эмбрионов мышей, криоконсервированных методом витрификации. Криобиология. 1987;24(5):387–402.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Nickell PK, Sass S, Verleye D, Blumenthal EM, Duman JG: Белки-антифризы в первичной моче личинок жука Dendroides canadensis .J Experimental Biol 2013, 216(9):1695.

  • Кожа SR, Walters KFA, Bale JS. Экология зимовки насекомых. Кембридж: Издательство Кембриджского университета; 1993.

    Книга Google ученый

  • Ли Р.Е., Денлингер Д.Л. Насекомые при низкой температуре: Чепмен и Холл. Нью-Йорк: Нью-Йорк; 1991.

    Книга Google ученый

  • Вовк Б., Лейтл Э., Раш К.М., Месбах-Карими Н., Харрис С.Б., Фахи Г.М.Усиление витрификации блокирующими агентами из синтетического льда. Криобиология. 2000;40(3):228–36.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Вок Б., Фэйи Г.М. Ингибирование зародышеобразования бактериального льда полиглицериновыми полимерами. Криобиология. 2002;44(1):14–23.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Тан Х, Сонг Э, Лю Х, Лю Г, Ченг Х, Ван Ф.Успешная витрификация яичников мышей с использованием менее концентрированных криопротекторов с добавкой Supercool X-1000. Биология клеточного развития in vitro Животное. 2012;48(2):69–74.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Fahy GM, Wowk B, Wu J, Paynter S. Улучшенные растворы для витрификации, основанные на предсказуемости токсичности раствора для витрификации. Криобиология. 2004;48(1):22–35.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Тинг А.Ю., Йоман Р.Р., Лоусон М.С., Зелински М.Б.Синтетические полимеры улучшают результаты витрификации ткани яичников макак, что оценивается по гистологической целостности и развитию вторичных фолликулов in vitro. Криобиология. 2012;65(1):1–11.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Fahy GM, Guan N, de Graaf IAM, Tan Y, Griffin L, Groothuis GMM. Криоконсервация точных срезов тканей. Ксенобиотика. 2013;43(1):113–32.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Guan N, Blomsma SA, Fahy GM, Groothuis GMM, de Graaf IAM.Анализ изменений экспрессии генов для выяснения механизма холодового повреждения в прецизионных срезах печени. Токсикология Витро. 2013;27(2):890–9.

    КАС Статья Google ученый

  • Тинг А.И., Йоман Р.Р., Кампос Дж.Р., Лоусон М.С., Маллен С.Ф., Фахи Г.М., Зелински М.Б. Морфофункциональная сохранность преантральных фолликулов после витрификации ткани яичника макака в закрытой системе. Хум Репрод. 2013;28(5):1267–79.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Sun H, Glasmacher B, Hofmann N. Совместимые растворенные вещества улучшают криоконсервацию эндотелиальных клеток человека. Крио письма. 2012;33(6):485–93.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Фраймарк Д., Зель С., Вебер С., Худель К., Чермак П., Хофманн Н., Шпиндлер Р., Гласмахер Б.Систематическая оптимизация параметров протокола криоконсервации без использования Me(2)SO и сыворотки для мезенхимальных стволовых клеток человека. Криобиология. 2011;63(2):67–75.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Хопкинс Дж.Б., Бадо Р., Варкентин М., Торн Р.Е. Влияние обычных криопротекторов на критические скорости нагревания и образование льда в водных растворах. Криобиология. 2012;65(3):169–78.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Килбрайд П., Лэмб С., Милн С., Гиббонс С., Эрро Э., Банди Дж., Селден С., Фуллер Б., Моррис Дж.Пространственные соображения при криоконсервации образца большого объема. Криобиология. 2016;73(1):47–54.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Fahy GM, Wowk B, Wu J, Phan J, Rasch C, Chang A, Zendejas E. Криоконсервация органов путем витрификации: перспективы и последние достижения. Криобиология. 2004;48(2):157–78.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Вовк Б., Дарвин М., Харрис С.Б., Рассел С.Р., Раш К.М.Влияние метоксилирования растворенных веществ на стеклообразующую способность и стабильность растворов для витрификации. Криобиология. 1999;39(3):215–27.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Fahy GM, Wowk B, Wu J. Криоконсервация сложных систем: недостающее звено в цепочке поставок регенеративной медицины. Омоложение Рез. 2006;9(2):279–91.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Фэйи Г: 16.Контроль токсичности криопротекторов и травм от переохлаждения. Криобиология 2015, 71(1):169.

  • Yeung JC, Krueger T, Yasufuku K, de Perrot M, Pierre AF, Waddell TK, Singer LG, Keshavjee S, Cypel M. Исходы после трансплантации легких, сохраненные более 12 часов: ретроспективное исследование. Ланцет Респиратор Мед. 2017;5(2):119–24.

    Артикул Google ученый

  • Берендсен Т.А., Бруинсма Б.Г., Путс С.Ф., Саеиди Н., Уста О.Б., Уйгун Б.Е., Изамис М.Л., Тонер М., Ярмуш М.Л., Уйгун К.Переохлаждение обеспечивает длительную выживаемость трансплантата после 4 дней консервации печени. Нат Мед. 2014;20(7):790–3.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Симпкинс К.Э., Монтгомери Р.А., Хоксби А.М., Локк Дж.Е., Джентри С.Е., Уоррен Д.С., Сегев Д.Л. Время холодовой ишемии и исходы аллотрансплантата при трансплантации почки от живого донора: возможна ли транспортировка органов от живого донора? Am J Трансплантация. 2007;7(1):99–107.

    КАС Статья Google ученый

  • Тоцука Э., Фунг Дж.Дж., Ли М.С., Исии Т., Умехара М., Макино Ю., Чанг Т.Х., Тойоки Ю., Наруми С., Хакамада К. и др. Влияние времени холодовой ишемии и расстояния транспортировки трансплантата на послеоперационный исход при трансплантации печени человека. Серж сегодня. 2002;32(9):792–9.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Брюинсма Б.Г., Йе Х., Озер С., Мартинс П.Н., Фармер А., Ву В., Саеиди Н., Оп ден Дрис С., Берендсен Т.А., Смит Р.Н. и др.: Субнормотермическая машинная перфузия для сохранения и восстановления ex vivo человека печень для трансплантации.Am J Transpl 2014, 14 (6): 1400–1409.

  • Марко-Хименес Ф., Гарсия-Домингес Х., Хименес-Тригос Э., Вера-Доносо К.Д., Висенте Х.С. Витрификация предшественников почек как новый источник для трансплантации органов. Криобиология. 2015;70(3):278–82.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Garcia-Dominguez X, Vera-Donoso CD, Jimenez-Trigos E, Vicente JS, Marco-Jimenez F. Первые шаги к банкам органов: витрификация зачатков почек.Крио письма. 2016;37(1):47–52.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Уитчер Дж.П., Шринивасан М., Упадхьяй М.П. Роговичная слепота: глобальная перспектива. Бык Всемирная организация здравоохранения. 2001;79(3):214–21.

    КАС Google ученый

  • Голчет Г., Карр Дж., Харрис М.Г.: Почему у нас недостаточно доноров роговицы? Обзор литературы и обзор.Оптометрия (Сент-Луис, Миссури) 2000, 71 (5): 318–328.

  • Маркес-Кертис Л.А., МакГанн Л.Е., Эллиотт ДЖАВ. Экспансия и криоконсервация эндотелиальных клеток роговицы свиньи и человека. Криобиология. 2017; 77:1–13.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Армитидж В.Дж. Сохранение роговицы человека. Трансфузионная медицинская гемотерапия. 2011;38(2):143–7.

    Артикул Google ученый

  • Armitage WJ, Hall SC, Routledge C.Восстановление эндотелиальной функции после витрификации роговицы при -110°С. Исследовательская офтальмология Visual Sci. 2002;43(7):2160–4.

    Google ученый

  • Hallam D, Collin J, Bojic S, Chichagova V, Buskin A, Xu Y, Lafage L, Otten EG, Anyfantis G, Mellough C et al: Модель фактора комплемента H (Y402H) у пациентов с индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками ) полиморфизм демонстрирует характерные черты возрастной дегенерации желтого пятна и указывает на полезную роль воздействия УФ-излучения.Стволовые клетки (Дейтон, Огайо) 2017, 35(11):2305–2320.

  • Bunce C, Xing W, Wormald R. Причины слепых и частичных свидетельств о зрении в Англии и Уэльсе: апрель 2007 г. — март. Глаз (Лондон, Англия) 2010. 2008; 24 (11): 1692–9.

    Артикул Google ученый

  • Ван Дж.Дж., Митчелл П., Смит В., Камминг Р.Г. Двустороннее поражение возрастными очагами макулопатии в популяции. Брит Дж. Офтальмол. 1998;82(7):743–7.

    КАС Статья Google ученый

  • Пасович Л., Эйдет Дж. Р., Олстад О. К., Чен Д. Ф., Либерг Т., Утейм Т. П. Влияние температуры хранения на экспрессию генов выживания клеток в культивируемых клетках ARPE-19. Curr Eye Res. 2017;42(1):134–44.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Дурлу Ю.К., Тамаи М. Трансплантация пигментного эпителия сетчатки с использованием жизнеспособных криоконсервированных клеток.Трансплантация клеток. 1997;6(2):149–62.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Басу П.К., Саркар П., Менон И., Карре Ф., Персад С. Клетки пигментного эпителия сетчатки крупного рогатого скота, культивированные in vitro: характеристики роста, морфология, хромосомы, способность к фагоцитозу, активность тирозиназы и эффект замораживания. Эксп. Разр. 1983;36(5):671–83.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Honda S, Weigel A, Hjelmeland LM, Handa JT.Индукция укорочения теломер и репликативного старения путем криоконсервации. Коммуникации биохимических биофизических исследований. 2001;282(2):493–8.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Валтинк М., Энгельманн К., Крюгер Р., Шеллхорн М.Л., Лолигер С., Пушель К., Ричард Г. Структура банка клеток для трансплантации HLA-типированных криоконсервированных клеток пигментного эпителия сетчатки взрослого человека. Офтальмолог.1999;96(10):648–52.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Pannicke T, Ivo Chao T, Reisenhofer M, Francke M, Reichenbach A. Сравнительная электрофизиология глиальных клеток Мюллера сетчатки – обзор видов позвоночных. Глия. 2017;65(4):533–68.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Guidry C. Роль клеток Мюллера в фиброконтрактивных заболеваниях сетчатки.Прогресс исследования сетчатки глаза. 2005;24(1):75–86.

    КАС Статья Google ученый

  • Бидерманн Б., Вольф С., Коэн Л., Видеманн П., Бузе Э., Райхенбах А., Паннике Т. Пэтч-клэмп-запись глиальных клеток Мюллера после криоконсервации. J Neurosci Методы. 2002;120(2):173–8.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Фродл Э.М., Зауэр Х., Линдвалл О., Брундин П.Влияние гибернации или криоконсервации на выживаемость и интеграцию трансплантатов полосатого тела, помещенных в хвостатую скорлупу крысы, пораженную иботенатом. Трансплантация клеток. 1995;4(6):571–57.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Гейдж Ф.Х., Брундин П., Исаксон О., Бьорклунд А. Трансплантаты мозговой ткани эмбриона крысы выживают и иннервируют мозг хозяина после пятидневного хранения ткани до трансплантации. Нейроски Летт. 1985; 60 (2): 133–7.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Никха Г., Эберхард Дж., Олссон М., Бьорклунд А. Сохранение вентральных мезэнцефальных клеток плода путем хранения в холодильнике: жизнеспособность in-vitro и выживаемость TH-позитивных нейронов после микротрансплантации в полосатое тело. Мозг Res. 1995;687(1–2):22–34.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Отто Ф., Горц П., Флейшер В., Зиблер М.В криоконсервированных клетках коры головного мозга крыс развиваются функциональные нейронные сети на массивах микроэлектродов. J Neurosci Методы. 2003;128(1–2):173–81.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Карлссон Дж. О., Тонер М. Долгосрочное хранение тканей путем криоконсервации: критические вопросы. Биоматериалы. 1996;17(3):243–56.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Луйет Б., Гонсалес Ф.Рост нервной ткани после замораживания в жидком азоте. Биодинамика. 1953; 7 (141–144): 171–4.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Итикава Дж., Ямада Р.Х., Мурамацу Р., Икегая Й., Мацуки Н., Кояма Р. Криоконсервация зернистых клеток постнатального гиппокампа крысы. J Pharmacol Sci. 2007;104(4):387–91.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Пейнтер С.Дж.Принципы и практические вопросы криоконсервации нервных клеток. Мозг Рес Бык. 2008;75(1):1–14.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Ма XH, Ши Y, Хоу Y, Лю Y, Чжан L, Fan WX, Ge D, Лю TQ, Цуй ZF. Медленно-замораживающая криоконсервация сфер нейральных стволовых клеток различного диаметра. Криобиология. 2010;60(2):184–91.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Фанг Дж, Чжан ZX.Криоконсервация эмбриональной мозговой ткани крысы. Криобиология. 1992;29(2):267–73.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Дас Г.Д., Хоул Дж.Д., Браско Дж., Дас К.Г. Замораживание нервных тканей и их трансплантация в мозг крыс: технические подробности и гистологические наблюдения. J Neurosci Методы. 1983;8(1):1–15.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Хиггинс А.З., Каллен Д.К., ЛаПлака М.С., Карлссон Д.О.Влияние параметров профиля замораживания на выживаемость криоконсервированных эмбриональных нервных клеток крысы. J Neurosci Методы. 2011;201(1):9–16.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Негиши Т., Исии Ю., Кавамура С., Курода Ю., Йошикава Ю. Криоконсервация мозговой ткани для первичной культуры. Опыт Аним. 2002;51(4):383–90.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Квастхофф К., Ферреа С., Флейшер В., Тайсс С., Шницлер А., Дине М., Уолтер Дж.Свежезамороженные клетки коры головного мозга крыс E18 могут генерировать функциональные нейронные сети после стандартных процедур криоконсервации и оттаивания. Цитотехнология. 2015;67(3):419–26.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Robert MC, Juan de Paz L, Graf DA, Gazzin S, Tiribelli C, Bottai H, Rodriguez JV: Криоконсервация путем медленного охлаждения нейронных клеток крыс. Криобиология 2016, 72(3):191–197.

  • Пейнтер С.Дж., Эндрюс К.Дж., Винх Н.Н., Келли С.М., Россер А.Е., Амсо Н.Н., Даннетт С.Б.Коэффициенты проницаемости мембран первичных нервных клеток мозга мышей в присутствии криопротектора. Криобиология. 2009;58(3):308–14.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Кавамото Дж.С., Барретт Дж.Н. Криоконсервация первичных нейронов для культуры тканей. Мозг Res. 1986;384(1):84–93.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Пишедда Ф., Монтани С., Обергастейгер Дж., Фраппорти Г., Корти С., Розато Сири М., Вольта М., Пикколи Г.Криоконсервация первичных нейронов мыши: преимущества криозащитной среды Neurostore. Неврологи передней клетки. 2018;12:81.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Hancock CR, Wetherington JP, Lambert NA, Condie BG. Нейрональная дифференцировка криоконсервированных нейронных клеток-предшественников, полученных из эмбриональных стволовых клеток мыши. Коммуникации биохимических биофизических исследований. 2000;271(2):418–21.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Сандлисэтер Э., Ван Дж., Сакариассен П.О., Мари М., Матисен Дж.Р., Карлсен Б.О., Престегарден Л., Скафтнесмо К.О., Бьерквиг Р., Энгер П.О. Сфероиды первичной глиомы после криоконсервации сохраняют онкогенность и основные фенотипические признаки. Нейропатол прикладной нейробиол. 2006;32(4):419–27.

    КАС Статья Google ученый

  • Purcell WM, Atterwill CK, Xu J.Криоконсервация органотипических культур сфероидов головного мозга. Альтернативы Лабораторные животные. 2003;31(6):563–73.

    КАС Статья Google ученый

  • Costa PF, Dias AF, Reis RL, Gomes ME. Криоконсервация тканеинженерных конструкций клеток/скаффолдов. Тканевая инженерия, часть C, методы. 2012;18(11):852–8.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Накано Т., Андо С., Таката Н., Кавада М., Мугурума К., Секигучи К., Сайто К., Ёнемура С., Эйраку М., Сасаи Ю.Самостоятельное формирование глазных чашечек и сохраняемой стратифицированной нервной сетчатки из ЭСК человека. Клеточная стволовая клетка. 2012;10(6):771–85.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Reichman S, Slembrouck A, Gagliardi G, Chaffiol A, Terray A, Nanteau C, Potey A, Belle M, Rabesandratana O, Duebel J et al: Создание сохраняемых органоидов сетчатки и пигментированного эпителия сетчатки из прикрепленных человеческих iPS клеток в бесксено- и безфидерных условиях.Стволовые клетки (Дейтон, Огайо) 2017, 35(5):1176–1188.

  • Massie I, Selden C, Morris J, Hodgson H, Fuller B. Криоконсервация инкапсулированных сфероидов печени с использованием безкриогенного охладителя: высокое функциональное восстановление с использованием многоступенчатого профиля охлаждения. Крио письма. 2011;32(2):158–65.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Джитраруч С., Дхаван А., Хьюз Р.Д., Филиппи С., Лехек С.К., Гловер Л., Митри Р.Р.Криоконсервация микрогранул гепатоцитов для клинической трансплантации. Трансплантация клеток. 2017;26(8):1341–54.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Урбани Л., Магсудлу П., Милан А., Менику М., Хаген К.К., Тотонелли Г., Камилли К., Итон С., Бернс А., Оливо А. и др. Долгосрочная криоконсервация децеллюляризованных пищевода для клинического применения тканевой инженерии. ПЛОС Один. 2017;12(6):e0179341.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Грант Л., Раман Р., Цветкович С., Ферралл-Фэрбенкс М.С., Паган-Диаз Г.Дж., Хэдли П., Ко Э., Платт М.О., Башир Р.Длительная криоконсервация и возрождение тканевой инженерии скелетных мышц. Tissue Eng A. 2018.

  • Day AGE, Bhangra KS, Murray-Dunning C, Stevanato L, Phillips JB. Влияние гипотермической и криогенной консервации на искусственную нервную ткань. Тканевая инженерия Часть C, Методы. 2017;23(10):575–82.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Мукерджи Н., Чен З., Самбанис А., Сонг Ю.Влияние криоконсервации на жизнеспособность клеток и секрецию инсулина в модели тканеинженерного заменителя поджелудочной железы (TEPS). Трансплантация клеток. 2005;14(7):449–56.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Yin H, Cui L, Liu G, Cen L, Cao Y. Криоконсервация стекловидного тела тканевой инженерии кости, состоящей из мезенхимальных стволовых клеток костного мозга и частично деминерализованного костного матрикса. Криобиология. 2009;59(2):180–7.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Тэм Э., МакГрат М., Сладкова М., АлМанайе А., Алостаад А., де Пеппо Г.М. Гипотермическая и криогенная консервация тканеинженерной кости человека. Энн Н.Ю. Академия наук. 2020;1460(1):77–87.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Chen F, Zhang W, Wu W, Jin Y, Cen L, Kretlow JD, Gao W, Dai Z, Wang J, Zhou G и др.Криоконсервация тканеинженерных эпителиальных слоев в трегалозе. Биоматериалы. 2011;32(33):8426–35.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Wang X, Hua TC, Sun DW, Liu B, Yang G, Cao Y. Криоконсервация тканеинженерной кожной замены в Me2SO: исследование токсичности и влияние концентрации и скорости охлаждения на жизнеспособность клеток. Криобиология. 2007;55(1):60–5.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Родригес-Уоллберг К.А., Уотерстоун М., Анастасио А.Ледниковый период: криоконсервация при вспомогательной репродукции — обновление. Репродуктивная биол. 2019;19(2):119–26.

    Артикул Google ученый

  • Condorelli M, Demeestere I. Проблемы сохранения фертильности при неонкологических заболеваниях. Acta Obstet Gynecol Scand. 2019;98(5):638–46.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Ян Х., Рамштайн Дж., Смит Дж.Неонкологические показания к сохранению мужской фертильности. Текущие отчеты Урол. 2019;20(9):51.

    Артикул Google ученый

  • Барам С., Майерс С.А., Йи С., Либрах С.Л. Сохранение фертильности у трансгендерных подростков и молодых людей: систематический обзор. Обновление воспроизведения гула. 2019;25(6):694–716.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Сингер С.Т., Свитерс Н., Вега О., Хига А., Вичинский Э., Сидарс М.Потенциал фертильности у женщин с большой талассемией: текущие данные и будущие диагностические инструменты. Энн Н.Ю. Академия наук. 2010;1202:226–30.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Киран К., Шнорхаворян М. Проблемы фертильности в детской урологии. Урологические клиники North Am. 2018;45(4):587–99.

    Артикул Google ученый

  • Смит М.А., Альтекрусе С.Ф., Адамсон П.С., Риман Г.Х., Сейбел Н.Л.Снижение детской и подростковой смертности от рака. Рак. 2014;120(16):2497–506.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Font-Gonzalez A, Mulder RL, Loeffen EA, Byrne J, van Dulmen-den Broeder E, van den Heuvel-Eibrink MM, Hudson MM, Kenney LB, Levine JM, Tissing WJ, et al. Сохранение фертильности у детей, подростков и молодых людей с раком: качество руководств по клинической практике и варианты рекомендаций.Рак. 2016;122(14):2216–23.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Киган Т.Х., Рис Л.А., Барр Р.Д., Гейгер А.М., Дальке Д.В., Поллок Б.Х., Блейер В.А. Сравнение тенденций выживания рака в США у подростков и молодых людей с детскими и пожилыми людьми. Рак. 2016;122(7):1009–16.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Доннез Дж., Долманс М.М.Сохранение фертильности у женщин. Новая Англия J Med. 2017;377(17):1657–65.

    Артикул Google ученый

  • Mossad H, Morshedi M, Toner JP, Oehninger S. Влияние криоконсервации на сперматозоиды бесплодных мужчин: значение для искусственного оплодотворения. Архив андрологии. 1994;33(1):51–7.

    КАС Статья Google ученый

  • Вутяванич Т., Пиромлертаморн В., Нунта С.Быстрое замораживание по сравнению с медленным программируемым замораживанием сперматозоидов человека. Фертильность Бесплодие. 2010; 93(6):1921–8.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Riva NS, Ruhlmann C, Iaizzo RS, Marcial López CA, Martinez AG. Сравнительный анализ между медленным и сверхбыстрым замораживанием для криоконсервации спермы человека. Вспомогательная репродукция JBRA. 2018;22(4):331–37.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Li YX, Zhou L, Lv MQ, Ge P, Liu YC, Zhou DX.Витрификация и традиционные методы замораживания при криоконсервации спермы: систематический обзор и метаанализ. Eur J Obstetrics Gynecol Reproductive Biol. 2019; 233:84–92.

    КАС Статья Google ученый

  • Horne G, Atkinson AD, Pease EH, Loge JP, Brison DR, Lieberman BA: Живорождение с криоконсервацией спермы в течение 21 года до лечения рака: клинический случай. Репродукция человека (Оксфорд, Англия) 2004, 19(6):1448–1449.

  • Feldschuh J, Brassel J, Durso N, Levine A. Успешное хранение спермы в течение 28 лет. Фертильность Бесплодие. 2005;84(4):1017.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Szell AZ, Bierbaum RC, Hazelrigg WB, Chetkowski RJ. Живорождения из замороженной человеческой спермы хранятся 40 лет. J Генетика вспомогательной репродукции. 2013;30(6):743–4.

    Артикул Google ученый

  • Hezavehei M, Sharafi M, Kouchesfahani HM, Henkel R, Agarwal A, Esmaeili V, Shahverdi A.Криоконсервация спермы: обзор современной молекулярной криобиологии и передовых подходов. Репродуктивная биомедицина онлайн. 2018;37(3):327–39.

    КАС Статья Google ученый

  • Brinster RL: Мужские половые стволовые клетки: от мышей до мужчин. Наука (Нью-Йорк, штат Нью-Йорк) 2007, 316 (5823): 404–405.

  • Ангарита А.М., Джонсон К.А., Фейдер А.Н., Кристиансон М.С. Сохранение фертильности: ключевой вопрос выживания молодых женщин с раком.Фронт Онкол. 2016;6:102.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • McLaren JF, Bates GW. Сохранение фертильности у женщин репродуктивного возраста с онкологическими заболеваниями. Am J Акушерство Гинекол. 2012;207(6):455–62.

    Артикул Google ученый

  • Rezazadeh Valojerdi M, Eftekhari-Yazdi P, Karimian L, Hassani F, Movaghar B. Витрификация по сравнению с медленным замораживанием обеспечивает превосходную выживаемость, морфологию эмбриона после нагревания и исходы беременности для расщепленных эмбрионов человека.J Генетика вспомогательной репродукции. 2009;26(6):347–54.

    Артикул Google ученый

  • Лутради К.Э., Колибианакис Э.М., Венетис К.А., Папаниколау Э.Г., Падос Г., Бонтис И., Тарлатзис Б.К. Криоконсервация эмбрионов человека путем витрификации или медленного замораживания: систематический обзор и метаанализ. Фертил Стерил. 2008;90(1):186–93.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Кобо А., Гарсия-Веласко Дж.А., Коэльо А., Доминго Дж., Пеллисер А., Ремохи Дж.: Витрификация ооцитов как эффективный вариант избирательного сохранения фертильности.Fertility Sterility 2016, 105(3):755–764.e758.

  • Хадсон Дж. Н., Стэнли Н. Б., Нахата Л., Боуман-Курчи М., Куинн Г.П. Новые многообещающие стратегии онкофертильности. Expert Rev Qual Life Cancer Care. 2017;2(2):67–78.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Мэтсон П.Л., Грэфлинг Дж., Джанк С.М., Йович Дж.Л., Эдирисинге В.Р. Криоконсервация ооцитов и эмбрионов: использование мышиной модели для исследования влияния на твердость зон и формулирования стратегий лечения в программе экстракорпорального оплодотворения.Хум Репрод. 1997;12(7):1550–3.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Boiso I, Martí M, Santaló J, Ponsá M, Barri PN, Veiga A. Анализ конфокальной микроскопии веретена и конфигурации хромосом ооцитов человека, криоконсервированных на стадии зародышевого пузырька и метафазы II. Хум Репрод. 2002; 17 (7): 1885–91.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Эдгар Д.Х., Гук Д.А.Критическая оценка криоконсервации (медленное охлаждение по сравнению с витрификацией) ооцитов и эмбрионов человека. Обновление воспроизведения гула. 2012;18(5):536–54.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Нойес Н., Порку Э., Борини А. Более 900 детей после криоконсервации ооцитов родились без явного увеличения врожденных аномалий. Репродуктивная биомедицина онлайн. 2009;18(6):769–76.

    КАС Статья Google ученый

  • Чжао Х., Джин Л., Ли И., Чжан С., Ван Р., Ли И., Хуан В., Цуй С., Чжан Х., Ван Х. и др.Онкофертильность: что мы можем делать от скамейки до кровати? Рак Летт. 2019; 442: 148–60.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Donnez J, Dolmans MM, Demylle D, Jadoul P, Pirard C, Squifflet J, Martinez-Madrid B, van Langendonckt A: Живорождение после ортотопической трансплантации криоконсервированной ткани яичника. Ланцет (Лондон, Англия) 2004, 364 (9443): 1405–1410.

  • Мейроу Д., Раанани Х., Шапира М., Бренгхаузен М., Дерех Хаим С., Авиель-Ронен С., Амариглио Н., Шифф Э., Орвието Р., Дор Дж.Трансплантации замороженно-размороженной ткани яичников демонстрируют высокую репродуктивную функцию и необходимость пересмотра ограничительных критериев. Фертильность Бесплодие. 2016;106(2):467–74.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Biasin E, Salvagno F, Berger M, Nesi F, Quarello P, Vassallo E, Evangelista F, Marchino GL, Revelli A, Benedetto C, et al. Криоконсервация ткани яичников у девочек, перенесших трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток: опыт одного центра.Пересадка костного мозга. 2015;50(9):1206–11.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Андерсон Р.А., Уоллес У.Б., Телфер Э.Е. Криоконсервация ткани яичника для сохранения фертильности: клинические и исследовательские перспективы. Открытая выставка репродукции человека 2017, 2017(1).

  • Sun C, Yue J, He N, Liu Y, Zhang X, Zhang Y. Основные принципы банка стволовых клеток. Adv Experimental Med Biol.2016; 951:31–45.

    КАС Статья Google ученый

  • Харрис Д.Т. Банк стволовых клеток для регенеративной и персонализированной медицины. Биомедицины. 2014;2(1):50–79.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Глюкман Э., Броксмайер Х.А., Ауэрбах А.Д., Фридман Х.С., Дуглас Г.В., Деверги А., Эсперу Х., Тьерри Д., Соси Г., Лен П. и др. Восстановление кроветворения у пациента с анемией Фанкони с помощью пуповинной крови HLA-идентичного брата.Новая Англия J Med. 1989;321(17):1174–1178.

    КАС Статья Google ученый

  • Баллен К.К., Вертер Ф., Курцберг Дж. Донорство пуповинной крови: государственное или частное? Пересадка костного мозга. 2015;50(10):1271–8.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Баллен К.К., Глюкман Э., Броксмейер Х.Э. Трансплантация пуповинной крови: первые 25 лет и далее.Кровь. 2013;122(4):491–8.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Хуан С.И., Лю С.Л., Тин С.И., Чиу Ю.Т., Ченг Ю.С., Николсон М.В., Се PCH. Банковское дело iPSC человека: барьеры и возможности. J биомедицинских наук. 2019;26(1):87.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Бойич С., Воларевич В., Люич Б., Стойкович М.Зубные стволовые клетки — характеристики и потенциал. Гистология Гистопат. 2014;29(6):699–706.

    КАС Google ученый

  • Hilkens P, Driesen RB, Wolfs E, Gervois P, Vangansewinkel T, Ratajczak J, Dillen Y, Bronckaers A, Lambrichts I. Криоконсервация и хранение стволовых клеток зубов. Advances Experimental Med Biol. 2016; 951:199–235.

    КАС Статья Google ученый

  • Де Лука М., Айути А., Коссу Г., Пармар М., Пеллегрини Г., Роби П.Г.Достижения в исследованиях стволовых клеток и терапевтических разработках. Природа Клетка Биол. 2019;21(7):801–11.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Сармиенто М., Рамирес П., Пароди Р., Салас М.К., Бефферманн Н., Хара В., Бертин П., Писарро И., Лорка С., Ривера Э. и др. Преимущества трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток без криоконсервации по сравнению с криоконсервированной стратегией. Пересадка костного мозга. 2018;53(8):960–6.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Алам HB. Уход за травмами: найти лучший способ. ПЛОС Мед. 2017;14(7):e1002350.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Lyon RM, Robertson CE, Clegg GR. Терапевтическая гипотермия в отделении неотложной помощи после внебольничной остановки сердца. Эмер Мед Дж.2010;27(6):418.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Катчер М.Э., Форсайт Р.М., Тишерман С.А.: Экстренная консервация и реанимация при остановке сердца в результате травмы. Int J Surg (Лондон, Англия) 2016, 33 (Pt B): 209–212.

  • Гарсия-Роа М., Дель Кармен Висенте-Аюсо М., Бобес А.М., Педраса А.С., Гонсалес-Фернандес А., Мартин М.П., ​​Саес И., Сегатчиан Х., Гутьеррес Л.: Время хранения эритроцитов и переливание: текущая практика, опасения и перспективы на будущее.Переливание крови = Trasfusione del sangue 2017, 15(3):222–231.

  • Nordeen CA, Martin SL: Разработка стазиса человека для длительного космического полета. Физиология (Bethesda, Мэриленд) 2019, 34 (2): 101–111.

  • Шукер А., Берейтер-Хан Дж., Зингер Д., Хельдмайер Г. Спящие астронавты — наука или вымысел? Арка Пфлюгера. 2019;471(6):819–28.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Айре М., Занканаро К., Малатеста М.Морфей — гипометаболический стаз у человека при длительном космическом полете. J Br Interplanet Soc. 2004; 57:325.

    Google ученый

  • Торпор, вызывающий перенос среды обитания человека на Марс [https://ntrs.nasa.gov/citations/20180008683].

  • Наступающее оцепенение, вызывающее перенос среды обитания человека на Марс [https://ntrs.nasa.gov/citations/20180007195].

  • Tinganelli W, Hitrec T, Romani F, Simoniello P, Squarcio F, Stanzani A, Piscitiello E, Marchesano V, Luppi M, Sioli M и др.: Гибернация и радиозащита: экспрессия генов в печени и яичках облученных крыс в синтетическом оцепенении.Int J Mol Sci 2019, 20 (2).

  • Мазур П. Равновесное, квазиравновесное и неравновесное замораживание эмбрионов млекопитающих. Клеточная биофиз. 1990;17(1):53–92.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Schneider U, Mazur P. Осмотические последствия проницаемости криопротекторов и их связь с выживаемостью замороженных-оттаивающих эмбрионов. Териогенология. 1984;21(1):68–79.

    КАС Статья Google ученый

  • Бенсон Дж.Д., Чиконе К.С., Крицер Дж.К.Аналитические оптимальные управления для введения и удаления криопротекторов с ограничениями по состоянию. Бык Математика Биол. 2012;74(7):1516–30.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Кашуба С.М., Бенсон Д.Д., Крицер Д.К. Рационально оптимизированная криоконсервация нескольких линий эмбриональных стволовых клеток мыши: I — сравнительная фундаментальная криобиология нескольких линий эмбриональных стволовых клеток мыши и последствия для протоколов криоконсервации эмбриональных стволовых клеток.Криобиология. 2014;68(2):166–75.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Weng L, Chen C, Zuo J, Li W. Изучение молекулярной динамики влияния температуры и концентрации на способность этиленгликоля и глицерина образовывать водородные связи: значение для криоконсервации. J Phys Chem A. 2011;115(18):4729–37.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Baxter SJ, Lathe GH.Биохимические эффекты воздействия высоких концентраций диметилсульфоксида на почки. Биохим Фармакол. 1971; 20 (6): 1079–91.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Замораживание эмбрионов (криоконсервация): цель и результаты

    Обзор

    Что такое замораживание эмбрионов?

    Замораживание эмбрионов, также называемое криоконсервацией эмбрионов, представляет собой процесс замораживания и хранения эмбрионов для последующего использования.Эмбрион – это яйцеклетка, оплодотворенная сперматозоидом. Этот процесс является способом помочь людям с фертильностью и репродукцией.

    Зачем замораживать эмбрион?

    Замораживание эмбрионов часто происходит после того, как люди пытаются забеременеть. Примеры включают экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) и интрацитоплазматическую инъекцию сперматозоидов (ИКСИ).

    Эти процедуры оплодотворяют яйцеклетку спермой и иногда создают дополнительные эмбрионы. Вы можете заморозить дополнительные эмбрионы и использовать их позже, если:

    • Отложите или отмените имплантацию в матку после того, как яйцеклетка уже оплодотворена.
    • Хотите отложить ЭКО на более поздний срок.
    • Требуется вариант на случай, если ранние попытки лечения бесплодия потерпят неудачу.
    • Лучше пожертвовать неиспользованные эмбрионы другим людям, пытающимся забеременеть, или исследователям, а не уничтожать их.

    Замораживание эмбрионов также используется для сохранения фертильности. Например, женщина или человек, у которых при рождении указан женский пол (DFAB) с раком, могут захотеть сохранить оплодотворенные яйцеклетки перед началом химиотерапии или лучевой терапии, если это лечение может повлиять на их способность забеременеть.Трансгендерный мужчина (превращающийся в мужчину) также может заморозить яйцеклетки или эмбрионы, прежде чем принимать гормоны для перехода или делать операцию по подтверждению пола.

    В чем разница между замораживанием яйцеклеток и замораживанием эмбрионов?

    Криоконсервация эмбрионов замораживает оплодотворенную яйцеклетку. Программы фертильности также могут предлагать замораживание яйцеклеток, при котором неоплодотворенные яйцеклетки замораживаются.

    Стоит ли замораживать эмбрионы?

    Решение заморозить эмбрионы является личным. Затраты сильно различаются, и медицинская страховка может не покрывать лечение бесплодия.Вам придется учитывать свои цели, затраты, этические вопросы, предпочтения вашего партнера и другие соображения.

    Вредит ли замораживание эмбрионам?

    Замораживание может повредить эмбрионы. Размораживание их позже также может повредить их. Если заморозить несколько эмбрионов, некоторые или все могут не выжить.

    Ваш лечащий врач обсудит с вами, подходят ли ваши эмбрионы для замораживания, оттаивания и имплантации.

    Является ли ЭКО более успешным с замороженными эмбрионами?

    Ученые пока не пришли к единому мнению, у кого больше шансов забеременеть: свежий или замороженный эмбрион.Исследователи продолжают изучать этот вопрос.

    Детали процедуры

    Что происходит перед криоконсервацией эмбрионов?

    Вы должны дать разрешение на замораживание эмбрионов. Ваш поставщик медицинских услуг даст вам формы согласия для прочтения и подписания. В документах должны быть указаны такие детали, как:

    • Сколько эмбрионов будет заморожено.
    • Как долго они будут храниться (часто 10 лет).
    • Что происходит, когда время хранения истекает.
    • Что произойдет, если вы умрете или станете слишком больны, чтобы принимать решения до истечения срока хранения.
    • Для чего разрешено использовать эмбрионы (например, только для вашего лечения бесплодия или если они могут быть пожертвованы для исследований или для другой бесплодной пары).

    Ваш лечащий врач также может помочь вам решить, на какой эмбриональной стадии лучше всего заморозить один или несколько эмбрионов. Стадии, на которых возможна заморозка, включают:

    • Стадия дробления: когда одиночная клетка размножается до четырех-восьми клеток примерно через 72 часа.
    • Стадия бластоцисты: когда одна клетка размножается до 200–300 клеток через пять–семь дней.

    Что происходит при криоконсервации эмбрионов?

    Существует два метода заморозки эмбрионов: витрификация и медленная заморозка.

    Витрификация, специалисты по лечению бесплодия:

    • Добавьте к эмбрионам криозащитный агент (CPA). CPA — это жидкость, которая действует как антифриз и защищает клетки от кристаллов льда.
    • Немедленно поместите эмбрионы в емкости с жидким азотом при температуре -321° по Фаренгейту (-196,1° по Цельсию).

    Медленное замораживание перестало быть популярным, но некоторые специалисты по лечению бесплодия все еще могут его использовать.Медленное замораживание, специалисты по лечению бесплодия:

    • Добавьте к эмбрионам меньшее количество криозащитного агента (CPA), чем при витрификации.
    • Поместите эмбрионы в машину, которая охлаждает их, медленно снижая температуру в течение примерно двух часов.
    • Достаньте эмбрионы из холодильника и поместите их в емкости с жидким азотом при температуре -321° по Фаренгейту (-196,1° по Цельсию).

    Эмбрионы для любого процесса:

    • Хранится в контейнерах, похожих на маленькие соломинки.
    • Этикетка с информацией, которая идентифицирует их как ваши.

    Интересно, что эмбрионы сохраняют биологический возраст, в котором они были заморожены. Поэтому, если вы заморозите их в возрасте 35 лет и вернетесь к использованию в возрасте 50 лет, эмбрион не состарится.

    Что происходит после заморозки эмбрионов?

    Если позже потребуются замороженные эмбрионы, специалист по фертильности:

    • Достаньте эмбрионы из жидкого азота.
    • Дайте им медленно вернуться к нормальной температуре.
    • Замочите их, чтобы удалить CPA.
    • Используйте эмбрионы, как указано (например, перенесите их в матку).

    Риски/выгоды

    В чем преимущества криоконсервации эмбрионов?

    Замораживание эмбрионов может помочь людям забеременеть в более позднем возрасте, если они сталкиваются с текущими барьерами, такими как:

    • Преклонный возраст.
    • Гендерный переход.
    • Бесплодие.
    • Социальные/личные причины, например, если вы хотите получить высшее образование или у вас есть профессиональные требования и вы планируете отложить беременность на несколько лет.
    • Лечение, которое может отрицательно повлиять на фертильность (например, химиотерапия или лучевая терапия органов малого таза при раке).
    • Предстоящая военная операция.
    • Женщины, не имеющие партнера, могут беспокоиться о преклонном возрасте и выбирать либо замораживание яйцеклеток, либо эмбрионов, созданных с помощью донорской спермы.

    Каковы риски или осложнения этой процедуры?

    Замораживание эмбрионов не представляет риска для последующих беременностей, таких как врожденные дефекты или проблемы со здоровьем.Фактически, исследования результатов замороженных-размороженных эмбрионов показывают более низкие показатели преждевременных родов, низкой массы тела при рождении, ограничения роста и перинатальной смертности.

    Основные риски, связанные с криоконсервацией эмбрионов:

    • Повреждение эмбрионов в процессе замораживания.
    • Эмбрионы, не пригодные для замораживания.
    • Неспособность забеременеть после размораживания и имплантации эмбрионов.
    • Увеличение частоты медицинских проблем во время беременности, таких как преэклампсия и спектр приращения плаценты.
    • Многоплодные роды, если имплантировано более одного эмбриона (двойня или тройня).

    Восстановление и перспективы

    Удачен ли перенос замороженных эмбрионов?

    Перенос замороженных эмбрионов происходит, когда эмбрион размораживают и имплантируют в матку женщины. Процесс часто бывает успешным. Но ставки сильно различаются в зависимости от многих факторов, в том числе:

    • Общее состояние здоровья обоих родителей.
    • Возраст матери на момент извлечения яйцеклетки.
    • Наличие проблем с фертильностью, таких как эндометриоз, миомы и полипы матки.
    • Предыдущий успех или неудача лечения бесплодия и беременности.

    Ваш лечащий врач поможет вам понять факторы, которые могут повлиять на ваши шансы на успех.

    Что, если я передумаю замораживать свои эмбрионы?

    Вы или ваш партнер можете передумать в любой момент процесса. Если один из двух родителей решит не продолжать процесс, специалист по фертильности не может по закону продолжать.

    Если один из родителей решит не продолжать процедуру после того, как эмбрионы уже заморожены, специалист может предложить период ожидания для верности.Затем эмбрионы будут изъяты из хранилища и оставлены на гибель.

    Что делать, если я не использую замороженные эмбрионы?

    Если вы не используете замороженные эмбрионы, вы можете:

    • Выбросьте их. Клиника по лечению бесплодия достанет их из морозильной камеры и позволит оттаять, что сделает их нежизнеспособными.
    • Пожертвуйте их тому, кто пытается завести ребенка.
    • Пожертвуйте их на исследования.
    • Пожертвуйте их в образовательных целях (например, для обучения будущих специалистов по лечению бесплодия).

    Записка из клиники Кливленда

    Замораживание эмбрионов или криоконсервация — это процесс, при котором оплодотворенные яйцеклетки замораживаются и сохраняются для последующего использования. Это может помочь людям сохранить фертильность и иметь возможность забеременеть в более позднем возрасте. Если вы рассматриваете возможность криоконсервации эмбрионов, поговорите со своим лечащим врачом, гинекологом или репродуктологом.

    %PDF-1.6 % 1014 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 1014 92 0000000016 00000 н 0000003431 00000 н 0000003499 00000 н 0000004188 00000 н 0000004208 00000 н 0000004627 00000 н 0000005257 00000 н 0000005314 00000 н 0000005390 00000 н 0000005455 00000 н 0000005520 00000 н 0000005591 00000 н 0000005653 00000 н 0000005730 00000 н 0000006172 00000 н 0000006242 00000 н 0000006313 00000 н 0000006720 00000 н 0000008154 00000 н 0000008224 00000 н 0000009954 00000 н 0000011759 00000 н 0000013672 00000 н 0000014131 00000 н 0000014546 00000 н 0000014616 00000 н 0000016565 00000 н 0000018225 00000 н 0000018588 00000 н 0000018643 00000 н 0000018954 00000 н 0000020900 00000 н 0000077750 00000 н 0000079379 00000 н 0000079612 00000 н 0000079752 00000 н 0000081843 00000 н 0000085924 00000 н 0000086525 00000 н 0000438897 00000 н 0000439119 00000 н 0000439321 00000 н 0000442917 00000 н 0000446639 00000 н 0000453089 00000 н 0000453129 00000 н 0000453223 00000 н 0000453316 00000 н 0000453409 00000 н 0000453502 00000 н 0000453594 00000 н 0000453687 00000 н 0000453840 00000 н 0000453929 00000 н 0000454023 00000 н 0000454116 00000 н 0000454209 00000 н 0000454302 00000 н 0000454394 00000 н 0000454487 00000 н 0000454640 00000 н 0000454737 00000 н 0000454800 00000 н 0000454866 00000 н 0000454926 00000 н 0000455033 00000 н 0000455688 00000 н 0000455708 00000 н 0000455732 00000 н 0000455756 00000 н 0000455779 00000 н 0000455803 00000 н 0000455827 00000 н 0000455866 00000 н 0000455890 00000 н 0000455968 00000 н 0000456046 00000 н 0000456123 00000 н 0000456201 00000 н 0000456281 00000 н 0000456318 00000 н 0000456342 00000 н 0000456377 00000 н 0000456401 00000 н 0000456436 00000 н 0000456460 00000 н 0000456495 00000 н 0000456519 00000 н 0000456554 00000 н 0000456578 00000 н 0000456600 00000 н 0000002136 00000 н трейлер ]>> startxref 0 %%EOF 1105 0 объект > поток xڬUypUf7M){89ZJq&uc2 La&`l6JEEZ j»jW*xRm

    Метод криоконсервации эмбрионов Drosophila melanogaster

    Содержание поголовья

    Мух содержали в флаконах Drosophila (6 унций) при комнатной температуре (24.2 ± 0,5 °C, дополнительный рисунок 2). Взрослых извлекали из бутыли через 5–7 дней. Корм для мух был приготовлен по тому же рецепту, что и Блумингтонский фондовый центр. В частности, BSDC Cornmeal Food был приготовлен с использованием воды, дрожжей, соевой муки, желтой кукурузной муки, агара, светлого кукурузного сиропа и пропионовой кислоты в соответствии с инструкциями, приведенными на веб-сайте Bloomington Stock Center 31 .

    Обозначение и генотип животных, использованных в этом исследовании, представлены в Дополнительной таблице 4.

    Протокол криоконсервации

    Этап 1. Сбор и стадирование эмбрионов

    В первый день для сбора эмбрионов при комнатной температуре использовали в общей сложности 700–1200 мух в возрасте 1–4 дней. Обычно использовали четыре флакона с мухами, при необходимости использовали восемь и более флаконов. Мух помещали в пустой флакон Drosophila , накрытый сетчатой ​​тканью в качестве крышки (рис. 1а). Эмбрионы собирали в течение 1 часа на пластину из виноградного сока (диаметр 63 мм), смазанную дрожжевой пастой.Сбор в первый час служил процедурой очистки яиц от самок мух, и эти яйца были оставлены. Беспокойство мух было сведено к минимуму во время сбора эмбрионов. Чашки с виноградным соком с собранными зародышами были помечены конечным моментом времени сбора, например, 15:00 использовалось для маркировки сбора с 14:00 до 15:00. Эмбрионы помещали в температурный инкубатор при 20,1±0,05°С (Heratherm, Thermo Scientific) до достижения желаемой стадии криоконсервации. Температура 20 °C была выбрана таким образом, чтобы оптимальный возраст эмбриона для криоконсервации был достигнут в течение обычного рабочего дня на следующий день.В этой работе сбор эмбрионов происходил во второй половине дня и обычно выполнялось 2–4 сбора. Всего для каждого эксперимента собирали и криоконсервировали от 200 до 600 эмбрионов в зависимости от штамма Drosophila .

    Например, для стадирования эмбрионов на 2-й день коллекция эмбрионов, помеченная как 15:00 в 1-й день, достигнет 22-часового возраста в 13:00 на 2-й день.

    Этап 2. Дехорионизация и пермеабилизация были смыты с тарелки виноградного сока в корзину из нейлоновой сетки и дехлорированы в 50% отбеливателе в течение 2–4 минут (дополнительный рис.1). После промывания проточной водопроводной водой в течение 1–2 мин для удаления избытка отбеливателя эмбрионы вместе с сетчатой ​​корзинкой ненадолго промокали бумажным полотенцем и помещали в криобуфер (20 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 10 мМ Na
    2 HPO 4 , 1,8 мм KH 2 PO 4 , 4 мм MGCL 2 , 13 мм MGSO 4 , 60 мм глицин, 60 мм Глутамная кислота и 5 мМ молиновая кислота, рН 6,8, стерилизованные фильтруми) в чашке Петри диаметром 35 мм. Эмбрионы исследовали под препаровальным микроскопом, чтобы подтвердить удаление хорионов.Кроме того, была оценена морфология кишечника, чтобы подтвердить стадию эмбриона (рис. 1b).

    Перед пермеабилизацией в три отдельные 35-мм стеклянные чашки Петри в вытяжном шкафу добавляли ~4 мл изопропанола, смесь D-лимонена и гептана (1:4 объем/объем) и только гептан. Для переноса эмбрионов из одного раствора в другой использовали сетчатую корзину. В частности, сетчатую корзину вынимали из криобуфера и промокали бумажным полотенцем, чтобы удалить как можно больше жидкости, с последующим погружением в изопропанол на 5–10 с, пока все эмбрионы не опустились на дно.Затем сетчатую корзину с эмбрионами внутри несколько раз промокали бумажным полотенцем для удаления избытка изопропанола. Затем эмбрионы и сетчатую корзину сушили, обдувая влажным воздухом (т. е. через рот), пока сетка не стала прозрачной (дополнительный рисунок 29). Этот шаг предназначен для удаления воды с эмбриона, что позволяет последующее воздействие органического растворителя. Крайне важно удалить изопропанол путем сушки, поскольку мы заметили, что комбинация изопропанола с гептаном токсична для эмбрионов.Затем сетчатую корзину помещали в смесь D-лимонена и гептана на 10 с, чтобы сделать эмбрион пермеабилизированным. Точно так же после промокания бумажным полотенцем сетчатую корзину помещали в гептан на 5 с, чтобы удалить D-лимонен вокруг эмбриона, поскольку D-лимонен не может быть легко удален путем испарения. Наконец, гептан удаляли сушкой на воздухе, а проницаемые зародыши вместе с сетчатой ​​корзиной помещали обратно в криобуфер. Весь процесс пермеабилизации обычно занимает 1–2 мин.

    Шаг 3.Загрузка CPA и обезвоживание

    Сразу после пермеабилизации щеткой разбивали комки на отдельные эмбрионы, плавающие в виде монослоя с минимальным перекрытием (рис. 1b). Сетчатую корзину промокли, а затем поместили в 13% масс. раствор этиленгликоля (ЭГ), приготовленный с помощью криобуфера, в чашку Петри диаметром 35 мм. Эмбрионы должны оставаться плавающими, чтобы сохранить доступ к кислороду. Через 3 мин под препаровальным микроскопом на поверхности эмбриона наблюдались «складки», указывающие на объемную усадку (т.э., теряя воду) в ответ на более высокую внешнюю осмолярность (рис. 1с). Регистрировали процент эмбрионов, которые сморщились. Затем чашку Петри с 13% масс. ЭГ помещали во влажную камеру. Через 25 минут эмбрионы были осмотрены под препаровальным микроскопом, чтобы подтвердить, что они снова набухли до своей первоначальной формы, что указывает на то, что ЭГ проник в эмбрионы. Регистрировали процент эмбрионов, которые набухли обратно. Обычно, если эмбрионы находятся на правильной стадии и должным образом пермеабилизированы, >90% эмбрионов сморщиваются и набухают в 13 мас.% ЭГ (рис.1с).

    Затем сетчатую корзину промокли и поместили в раствор 39 % масс. ЭГ + 9% масс. сорбита, приготовленный в криобуфере на льду (т.е. ~4 °C) на 9 мин. На этом этапе происходит обезвоживание эмбрионов (т. е. потеря воды), тем самым повышается внутриэмбриональная концентрация ЭГ, что способствует витрификации во время охлаждения и предотвращает девитрификацию во время процессов отогревания. Как правило, использовали 5-6 мл дегидратационного CPA в чашке Петри диаметром 35 мм.

    Шаг 4. Перенос в криосетку

    После 9-минутной дегидратации сухую криосетку использовали для вдавливания плавающих обезвоженных эмбрионов в раствор CPA сверху (дополнительный рис.1). Почти все эмбрионы оставались прикрепленными к криосетке после подъема криосетки из раствора CPA. Бумажное полотенце использовалось для впитывания большей части оставшегося раствора CPA на криосетке с противоположной стороны без эмбрионов. Процесс затекания должен быть выполнен в течение 20 с, поскольку повышенная температура может увеличить токсичность CPA, что приведет к снижению выживаемости.

    Предполагая, что монослой эмбрионов упакован в среду (т. е. эмбрионы занимают 30% общей площади сетки), и каждый эмбрион занимает 0.07 мм 2 (=3,14 * половина длины эмбриона * половина ширины эмбриона = 3,14 * 0,25 мм* 0,09 мм), сетка размером 2 см * 2 см может вместить 1714 (=20 мм * 20 мм * 0,3/0,07) эмбрионов .

    Этап 5. Витрификация и повторное нагревание

    Криомеш с обезвоженными эмбрионами быстро погружали в жидкий азот. На этом этапе эмбрионы криоконсервируются и могут храниться в жидком азоте до использования в будущем. Чтобы согреть эмбрионы, криосетку быстро погружали в 30% раствор сахарозы, приготовленный в криобуфере (~40 мл раствора в стакане на 50 мл) при комнатной температуре, избегая при этом перемешивания.Было выбрано 30 % сахарозы, чтобы сохранить сплющенную форму эмбриона, чтобы избежать быстрой регидратации и отделения эмбрионов от криосетки.

    Этап 6. Разгрузка CPA и культивирование эмбрионов

    Через несколько секунд (т.е. 5 с) в 30% вес. путем переноса в криобуфер на 20 минут, чтобы окончательно удалить все внутриэмбриональные CPA. Наконец, эмбрионы переносили в чашку Петри диаметром 35 мм, наполненную 1 мл среды Шнайдера, с помощью кисточки.Чашку Петри закрывают крышкой и помещают во влажную камеру на ночь.

    Этап 7. Вылупление личинок и выход имаго

    На 3-й день вылупившихся личинок утром переносили из среды в пищевые флаконы (скорлупа 15 × 95 мм). Скорость вылупления эмбрионов рассчитывали, используя отношение количества вылупившихся личинок к общему количеству эмбрионов. Пищевые флаконы с личинками хранили при комнатной температуре. Через 15 дней количество личинок по отношению к взрослым рассчитывали, используя отношение вышедших взрослых особей к общему количеству личинок во флаконах.

    Измерение скорости охлаждения и нагревания

    Для измерения скорости охлаждения и нагревания методом криосетки использовали термопару типа Т с неизолированной проволокой (термопары тонкого калибра без оболочки, диаметр проволоки 50 мм, OMEGA) и осциллограф. Для тестирования различных криогенов азотная шуга была приготовлена ​​путем создания вакуума для охлаждения жидкого азота до образования шуги. Термопару приклеивали к криосетке и регистрировали температуру при охлаждении и нагревании только сетки.Кроме того, были собраны обезвоженные эмбрионы и помещены в контакт с термопарой на сетке, чтобы получить соответствующие скорости охлаждения/нагревания для нагруженной сетки с удаленным раствором CPA (рис. 3). Мы также измерили скорость охлаждения/согревания с раствором CPA, оставшимся на криосетке (рис. 3). Скорости охлаждения и нагревания были рассчитаны для представления скоростей во время охлаждения и нагревания в температурной зоне от -140 °C до -20 °C с использованием Microsoft Excel 2016. Важно отметить, что растворы CPA и загруженные CPA эмбрионов дрозофилы будут в стеклообразной фазе. при −140 °С.

    Моделирование скорости потепления

    Мы использовали COMSOL 5.4 для моделирования скорости потепления эмбрионов с помощью метода криосеши. Были рассмотрены два крайних условия: (1) минимальный контакт между обезвоженным эмбрионом и криосеткой и (2) максимальный контакт между обезвоженным эмбрионом и криосеткой (рис. 3). Поперечное сечение нейлоновых волокон было установлено как 150 ×80 мкм, апертура была 200мкм, длина и ширина зародыша были 500мкм и 180мкм соответственно на основе прямых измерений. Чтобы оценить толщину обезвоженных эмбрионов, мы сначала измерили массу 532 обезвоженных эмбрионов, которая составила 2.6 мг (рис. 3). Затем рассчитали, что вес одного обезвоженного эмбриона составляет 4,9 мкг. Принимая плотность обезвоженного эмбриона за плотность твердого содержимого эмбриона (1,37  г/мл) 32,33 , мы оцениваем толщину обезвоженного эмбриона как 50  мкм. Поскольку тепловые свойства обезвоженных эмбрионов неизвестны, мы использовали температурно-зависимые тепловые свойства CPA на основе предыдущих публикаций 27,34 . Для нейлоновой сетки плотность была установлена ​​равной 1,15 г/мл, теплопроводность и теплоемкость в зависимости от температуры получены из Национального института стандартов и технологий (NIST) 35,36,37 .В качестве граничных условий использовался конвективный тепловой поток с коэффициентом конвективной теплоотдачи 300 Вт/(м 2 *К) 38,39 . Скорость нагревания при различных поперечных сечениях через центральную точку эмбрионов сравнивали для двух экстремальных условий.

    Кроме того, мы смоделировали скорость потепления методами, использованными в предыдущих публикациях. В частности, поликарбонатный фильтр с размером пор 10 мкм (артикул № F10013–MB, поставки SPI) и медная сетка для электронного микроскопа с апертурой 200 мкм (артикул № G100-Cu, Electron Microscopy Sciences) (таблица S1).Мы предположили, что раствор CPA вокруг эмбрионов имеет толщину 250 мкм 8,9,14,15,40 .

    ПЦР

    Для отслеживания однонуклеотидного полиморфизма (SNP) штамма M2 после криоконсервации была получена ДНК одного взрослого мужчины. Муху помещали в пробирку Эппендорфа и раздавливали наконечником пипетки в 20 мкл раствора (10 мМ Трис-Cl, pH 8,2, 1 мМ ЭДТА, 25 мМ NaCl и 200 мкг/мл протеиназы К). Пробирку инкубировали при 65°С в течение 20 мин, затем при 95°С в течение 5 мин. Реакцию ПЦР проводили с использованием ДНК-полимеразы Go-Taq flexi в следующих циклах: 1x цикл 95 °C в течение 2 мин, 35x циклов 50°C 2 мин, 72°C 3 мин и 94°C 1 мин, 1 цикл 50 °C 2 мин и 72 °C 10 мин.Используемые праймеры представляли собой праймер 1: 5′-ACG ATC TGG ATC CAG TCG-3′ и праймер 2: 5′-GGA ATT CTT GTC TTC CTT GAC GCT CG-3′.

    Электронная микроскопия (ЭМ)

    Эмбрионы до и после пермеабилизации использовались для ЭМ визуализации. Были использованы аналогичные процедуры подготовки проб, как сообщалось ранее 41,42 . В частности, эмбрионы сначала разрывали небольшими отверстиями и фиксировали в 2% параформальдегиде и 2% глутаральдегиде в 0,1 М буфере какодилата натрия (рН 7,4) при 4°С в течение ночи.Затем эмбрионы промывали 0,1 М буфером какодилата натрия три раза (каждый раз по 15 мин), 1 ч в 4% четырехокиси осмия с последующим ополаскиванием в дистиллированной воде. Далее эмбрионы обезвоживали в серии растворов этанола и трех сменах пропиленоксида. Смолу добавляли для инфильтрации и полимеризации внутри эмбрионов в печи при 60°C в течение ночи. Наконец, были вырезаны ультратонкие срезы. Уранилацетат и цитрат свинца использовали для окрашивания срезов для ЭМ визуализации. ImageJ 1.52a использовался для маркировки изображения (дополнительный рис.5).

    Статистика

    Для графиков с двумя зависимыми переменными, например, скоростью вылупления и скоростью взрослых особей или скоростью охлаждения и скоростью нагревания, для статистического анализа в программном обеспечении SPSS Statistics 23 использовали многомерный дисперсионный анализ (MANOVA) и апостериорный анализ Тьюки.

    Для рис. 3b в Origin 2018 использовался парный двусторонний критерий Стьюдента t-.

    «нс» означает, что разница не является статистически значимой ( p  > 0,05), * p  ≤ 0,05.05, ** р  ≤ 0,01, *** р  ≤ 0,001, **** р  ≤ 0,0001. Значение p всего статистического анализа предоставляется в файле Excel в качестве дополнительных материалов.

    Сводка отчета

    Дополнительную информацию о планах эксперимента можно найти в Сводке отчета об исследованиях в природе, связанной с этим документом.

    простой альтернативный протокол криоконсервации

    159

    криосетки необходимо

    проанализировать в будущем для определения оптимального дизайна.

    Посткриогенная выживаемость и

    регенерация кончиков побегов A. viridis

    не показали существенной разницы между

    протоколами каплевидной витрификации и криосетчатого

    протокола, при этом протокол криосетчатого

    показал несколько большее скорость регенерации

    (рис. 3). Тем не менее, эффект воздействия

    времени PVS2 отличался между двумя протоколами

    , где более длительное время инкубации

    (40 мин) по сравнению с оптимальными 30 мин

    инкубации привело к значительному снижению

    выживаемости и регенерации для

    метода капельной витрификации, в то время как

    существенной разницы не наблюдалось при использовании

    с криосеткой.Это может быть связано с более медленной

    диффузией криозащитных агентов

    через альгинатное покрытие вокруг кончиков побегов

    , что видно при использовании протокола инкапсуляции-витрификации

    (14),

    что требует немного более длительной инкубации

    продолжительность. Будущая работа над разнообразным спектром

    видов растений даст представление о

    преимуществах и ограничениях этого протокола.

    Благодарности: Авторы

    выражают благодарность Австралийскому исследовательскому совету

    (грант LP140100993) за финансирование.

    Мы благодарим Drs Wei-Han Lim и

    Todd Erickson (University of Western

    Australia) за поставку сетки из нержавеющей стали

    , которая использовалась при разработке метода крио-

    сетки.

    ССЫЛКИ

    1. Fabre J & Dereuddre J (1990) CryoLetters

    11, 413-426.

    2. Fujino Y, Kojima T, Nakamura Y,

    Kobayashi H, Kikuchi K & Funahashi H

    (2008) Theriogenology 70, 809-817.

    3. Funnekotter B, Whiteley SE, Turner SR,

    Bunn E & Mancera RL (2015) CryoLetters

    36, 104-113.

    4. Kaczmarczyk A, Funnekotter B, Menon A,

    Phang PY, Al-Hanbali A, Bunn E & Mancera

    RL (2012) в Current Frontiers in

    Cryobiology, (ed) Katkov II, InTech, стр.

    417-438.

    5. Kaczmarczyk A, Turner SR, Bunn E,

    Mancera RL & Dixon KW (2011) In Vitro

    Cell.Дев. биол. Завод 47, 17-25.

    6. Kartha K, Leung N & Mroginski L (1982)

    Zeitschrift für Pflanzenphysiologie 107, 133-

    140.

    7. Martino A, Songsasen N & Leibo S (1996)

    3 ol. Воспр. 54, 1059-1069.

    8. Murashige T (1962) Physiol. Растение. 15, 473.

    9. Ниино Т., Ватанабэ К., Нохара Н., Рафик Т.,

    Ямамото С-и, Фукуи К., Аризага М.В.,

    Мартинес CRC, Мацумото Т. и Энгельманн

    F (2014) Plant Biotechnol.31, 281-287.

    10. Niino T, Yamamoto S, Fukui K, Martínez

    CRC, Arizaga MV, Matsumoto T &

    Engelmann F (2013) CryoLetters 34, 549-

    560, Piette & Bis 1.

    900 Pan Swennen R (2005) Plant

    Sci. 168, 45-55.

    12. Попова Э., Шукла М., Ким Х.Х. и Саксена П.К.

    (2015) в Достижениях в области селекции растений

    Стратегии: селекция, биотехнология и

    Молекулярные инструменты, Springer, стр.63-93.

    13. Рафик Т., Ямамото С., Фукуи К., Махмуд

    З. и Ниино Т. (2015) CryoLetters 36, 51-59.

    14. Tanaka D, Niino T, Isuzugawa K, Hikage T

    & Uemura M (2004) CryoLetters 25, 167-

    176.

    15. Turner SR, Senaratna T, Bunn E, Tan B,

    Диксон К.В. и Тачелл Д.Х. (2001) Энн. Бот.

    87, 371-378.

    16. Valle Arizaga M, Villalobos Navarro OF,

    Castillo Martinez CR, Cruz Gutiérrez EJ,

    López Delgado HA, Yamamoto Si,

    Watanabe K & Niino T (2016)

    3 900i Horticulture 10.2503/хорт.ОКД-2002.

    17. Ямамото С., Рафик Т., Фукуи К., Секизава

    К. и Ниино Т. (2012) CryoLetters 33, 12-23.

    18. Yamamoto S, Rafique T, Priyantha WS,

    Fukui K, Matsumoto T & Niino T (2011)

    CryoLetters 32, 256-265.

    Замораживание ткани яичника (криоконсервация) | Johns Hopkins Medicine

    Фертильность, беременность и роды Беременность Роды и роды Процедуры бесплодия Фертильность и репродуктивное здоровье

    Избранные эксперты:

    Что тебе нужно знать

    • Замораживание ткани яичников может дать шанс на будущую фертильность и выработку гормонов у детей и взрослых, проходящих лечение от рака или других заболеваний, поражающих яичники.
    • Ткань яичника, продуцирующая яйцеклетку, удаляется, замораживается и хранится до тех пор, пока пациентка не завершит лечение и не пожелает забеременеть или возобновить нормальную выработку гормонов.
    • В одном исследовании около 30% женщин с ранее замороженной тканью яичника, которым повторно ввели оттаявшую ткань в таз, смогли родить.
    • Первая процедура трансплантации предварительно замороженной ткани яичника была проведена в 1999 году. До 2019 года замораживание ткани яичника для сохранения фертильности считалось экспериментальным.

    Зачем мне замораживать ткань яичника или ткани моего ребенка?

    У женщин и девочек, подвергающихся определенным видам лечения, таким как хирургическое лечение рака, лучевая или химиотерапия, в результате может наблюдаться нарушение фертильности или выработка гормонов. Лица, перенесшие операцию по подтверждению пола , также могут захотеть сохранить ткань яичника.

    Криоконсервация ткани яичника позволяет удалить часть яичника, производящую яйцеклетку, называемую корой яичника, перед лечением пациентки, заморозить ее и сохранить.Ткань может быть пересажена годы спустя, чтобы сделать беременность возможной.

    В дополнение к увеличению вероятности наступления беременности сохранение ткани яичников также имеет дополнительное преимущество в виде выработки гормонов. Поврежденные яичники часто не могут вырабатывать важные гормоны, такие как эстроген или прогестерон, что требует от женщины обращения за гормональной терапией. Ранее замороженная здоровая ткань яичника может быть реимплантирована после лечения для восстановления естественной выработки гормонов.

    Криоконсервация яичников для сохранения фертильности: что происходит

    Когда пациент спит под наркозом, хирург делает небольшой надрез (разрез) в брюшной полости и вводит узкую трубку, называемую лапароскопом.Далее хирург удаляет ткань с поверхности одного яичника, которая содержит незрелые яйцеклетки. Часто один яичник удаляют, чтобы собрать достаточное количество ткани. Ткань тщательно разделяется на мелкие кусочки и мгновенно замораживается. Замороженная ткань яичников может храниться в течение нескольких лет в специально оборудованных хранилищах, где образцы тщательно контролируются и сохраняются.

    После того, как лечение закончено и женщина, у которой была удалена и заморожена ткань яичника, готова к восстановлению яичников, врачи могут разморозить ткань и вернуть ее в организм.В этой процедуре также используется лапароскоп. Хирург может сформировать карман в брюшине, мембрану, окружающую органы в брюшной полости, и поместить ткань в таз рядом с оставшейся тканью яичника.

    После замены размороженной ткани активность яичников должна начаться или возобновиться через несколько месяцев. В этот момент под руководством репродуктолога могут начаться попытки забеременеть.

    Беременность после трансплантации замороженной ткани яичника

    Если трансплантация прошла успешно и пациентка производит яйцеклетки, беременность может наступить естественным путем или путем экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).Согласно одному исследованию, процедура приводит к успешной беременности примерно у трети пациенток.

    Риск замерзания ткани яичника

    Сбор ткани и ее трансплантация являются хирургическими процедурами, которые выполняются с анестезией, что сопряжено с риском. Для пациентов с раком крови, таким как лейкемия, существует риск повторного введения раковых клеток в организм при повторной имплантации размороженной ткани яичника.

    Сколько стоит заморозка ткани яичника?

    Процедура забора, замораживания и хранения тканей, а также процедура трансплантации, когда женщина желает забеременеть, является платной.Страховые планы и некоторые организации поддержки рака могут покрывать некоторые или все расходы, связанные с замораживанием ткани яичника.

    Инновационный центр сохранения фертильности Джона Хопкинса

    Эксперты Инновационного центра сохранения фертильности Джона Хопкинса специализируются на новейших методах сохранения фертильности, включая замораживание яйцеклеток, сперматозоидов и тканей яичников.

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.

    *